多波长测定法在鳖甲煎丸提取物检测中的应用.pdf

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1、第37卷第5期云南中医学院学报Vo1．37No．52014年1O月JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine10．2014多波长测定法在鳖甲煎丸提取物检测中的应用盛云杰，付玲珠，郑婷，秦磊，张永生△(浙江中医药大学，浙江杭州310053)摘要：目的建立同时测定鳖甲煎丸中芍药苷、黄芩苷、丹皮酚3种有效成分含量的HPLC方法。方法采用AgilentZorbaxEclipseXDB—C18色谱柱(51*m，4．6mmxl50mm)，流动相为乙腈(A)和0．1％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，流速1．OmL／min；检测波长240、

2、274nm，柱温35℃。结果芍药苷、黄芩苷、丹皮酚线性浓度范围分别是：1．41～14．11p~g／mL(P=O．9999)，7．03～70．321xg／mL(F=0．9999)，1．23—12．32~g／mL(F=0．9997)对照品线性关系良好，各成分的平均回收率(n=9)分别为：100．84％、99．07％、99．08％．结论该方法准确、可靠、重现性好，可用于鳖甲煎丸提取物的质量控制。关键词：HPLC；鳖甲煎丸；芍药苷；黄芩苷；丹皮酚中图分类号：R284．2文献标志码：A文章编号：1000—2723(2014)05—0016—04经典处方“鳖甲煎丸”出自东汉医家张仲景所2方法与结

3、果著《金匮要略·疟病脉证并治第四》。本方攻补兼施，2．1色谱条件多用于正虚邪实，气虚血瘀之肝硬化的临床治疗，EclipseXDB—C18色谱柱(5Ixm，4．6mmxl50软坚散结之功效。临床上常用于治疗肝纤维化、肝mm)美国安捷伦科技公司；流动相A为0．1％磷酸炎肝硬化、心绞痛、高脂血症、血吸虫病肝脾肿大等水溶液，B为乙腈；梯度洗脱：O～10min流动相A为症，具有确切的临床疗效。鳖甲煎丸原标准收载13％，流动相B为87％；10—20minA为30％，B为于中华人民共和国药典1985年版一部，缺少含量70％；20～30minA为30％，B为7O％；30-33minA测定项目，李宝明

4、[51、张庆[61分别对鳖甲煎胶囊中的为13％，B为87％；33min后A为13％，B为87％．厚朴酚和芍药苷、黄芩苷等含量进行检测，但是未流速1．0mL／min，检测波长240nm及274nm，进样见对各含量用一种流动相体系同时进行检测的方量l0L，柱温35c《=，混合对照品、供试品、阴性制法。笔者对方法进行了改进，建立用同一种流动相剂的HPLC图谱见图1—3。体系，实现对牡丹皮、黄芩、白芍的相关指标成分的2．2对照品溶液的制备含量测定，既节约了时间，又节约了物料，同时可以精密称取芍药苷、黄芩苷、丹皮酚对照品适量，更加严格有效地控制人参鳖甲煎丸的质量，保证临加甲醇至50mL容量瓶使

5、溶解制成混合对照品储备床用药的有效性和安全性。现报告如下。溶液(浓度分别为14．11，70．32，12．32~g／mL)。精密1仪器与试药吸取各对照品溶液适量(1，2，3，4，5，10mE)，分别Waterse2695液相色谱仪(美国沃特斯公司)，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为十万分之一分析天平(德国赛多利斯)，丹皮酚、黄混合对照品溶液。芩苷、芍药苷(中国生物制品检定所)；鳖甲煎丸2．3线性关系考察(武汉中联药业)、甲醇、乙腈(德国默克色谱纯)、精密吸取上述混合对照品系列溶液lO，分乙醇(分析纯)、磷酸(分析纯)为国药集团化学试别注入液相色谱仪中测定，以各对照品浓度

6、为横坐剂公司。标，以峰面积为纵坐标进行回归，回归方程及线性％基金项目：浙江省重点科技创新团队项目(2012R10044—03)收稿日期：2014—08—29作者简介：盛云杰(1982一)，男，浙江杭州人，实验师，研究方向：中药质量标准及抗肝纤维化。△通信作者：张永生，E—mail：alex．yszhang@zemH．edu．cn16第5期盛云杰等：多波长测定法在鳖甲煎丸提取物检测中的应用1．芍药苷；2．黄芩苷；3．丹皮酚图1混合对照品(A)、样品溶液(B)和缺牡丹皮、白芍的阴性制剂(C)在240nm处的HPLC图谱1．芍药苷；2．黄芩苷；3．丹皮酚图2混合对照品(A)、样品溶液(B)

7、和缺黄芩的阴性制剂(C)在274nm处的HPLC图谱1．芍药苷；2．黄芩苷；3．丹皮酚图3混合对照品(A)、样品溶液(B)和缺牡丹皮、白芍的阴性制剂(C)在274nm处的HPLC图谱范围见表1。50％乙醇25mL，称定重量，超声提取120min，放冷，用50％乙醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤表1回归方程、相关系数及线性范围液，取续滤液5mL用50％乙醇定容至10mL过0．221~m滤膜即为供试品溶液。2．5精密度试验精密吸取混合对照品溶液1OL，注入液相