经方鳖甲煎丸抑制H22肝癌细胞血管生长的实验研究.pdf

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1、陕西中医2015年第36卷第7期929经方鳖甲煎丸抑制H22肝癌细胞血管生长的实验研究汤新跃广东省第二人民医院肿瘤二科(广kl'l510317)摘要目的：探讨经方鳖甲煎丸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠血管生长的抑制效果，为鳖甲煎丸在肝癌治疗的临床应用提供动物实验理论依据。方法：选用12O只昆明小鼠，以H22肝癌细胞建立H22荷瘤小鼠动物模型，随机分为A组、B组、C组和D组各30例，A组为高剂量鳖甲煎丸灌胃服用，B组为低剂量鳖甲煎丸灌胃服用，C组为环磷酰胺注射液腹腔注射，D组为阴性对照组，连续用药15d后将其处死，剥离瘤块并检测肿瘤组织的微血管

2、计数和血管内皮生长因子表达阳性的细胞面积占肿瘤细胞面积的比例并进行对比。结果：A组小鼠的微血管计数结果为(4．08±1．32)条，显著少于其余三组小鼠(均P<0．05)；B组小鼠的微血管计数结果为(7．72±1．51)条，显著少于C组和D组小鼠(均P<0．05)；A组小鼠的血管内皮生长因子表达阳性细胞所占面积为(2．32土1．08)，显著少于其余三组小鼠(均P<0．05)；B组小鼠的血管内皮生长因子表达阳性细胞所占面积为(5．61±1．42)9／6，显著少于C组和D组小鼠(均P<0．05)，C组小鼠的血管内皮生长因子表达阳性细胞所占面积

3、为(9．21±3．36)，显著少于D组小鼠(P<0．05)。结论：鳖甲煎丸可显著降低H22荷瘤小鼠肝癌组织血管内皮生长因子的表达，抑制新生微血管的生成，进而对肿瘤组织的生长和转移有一定的抑制作用。主题词肝肿瘤／中医药疗法@鳖甲煎丸动物，实验小鼠【中图分类号】R735．7【文献标识码】Adoi：10．3969／j．issn．1000—7369．2015．07．083鳖甲煎丸出自于张仲景的《金匮要略》，其方药组成较多，椎脱臼法处死，蜡板固定后，将其腹腔内的腹水抽出。以相同具有平调寒热、攻补并用、软坚散结、行气化瘀的作用。《金匮体积的0．9氯

4、化钠注射液将抽出的腹水稀释后，采用0．2台要略》中以疟病日久引起的疟母、瘕瘕为其主治证。然而，随着盼蓝染色，将肿瘤细胞悬液的浓度调整为6×10／mL。然后抽现代研究的深入，鳖甲煎丸的临床应用得到了不断的扩展，目取0．2mL于每只小鼠的右后肢皮下注射，接种完成后24h开始前已经有应用鳖甲煎丸治疗肝硬化、肝吸虫等，同时也有动物各组小鼠给药。鳖甲煎丸悬液的制备采用蒸馏水和鳖甲煎丸试验证实，鳖甲煎丸具有一定的抗肝纤维化、肾间质纤维化的配制而成。分别配制浓度为0．024g／mL和0．048g／mL两种浓作用D-z]。在肿瘤的治疗上，鳖甲煎丸也有治

5、疗肝癌的报道，且度的鳖甲煎丸悬液，配制完成后，储存于4H的环境中备用。A取得一定的临床疗效[3]。然而，由于本方所包含的方药较多，组小鼠按照每天每公斤12g的剂量灌胃服用鳖甲煎丸悬液，B且用法较为独特，而其治疗肝癌的报道多为个案研究，较少药组小鼠按照每天每公斤体重6g的剂量灌胃服用鳖甲煎丸悬理及动物实验的数据支撑，这将直接影响鳖甲煎丸进一步临床液，C组小鼠每天按照每公斤体重20rag的剂量腹腔注射环磷应用。本研究观察鳖甲煎丸对H22肝癌细胞血管生长的抑制酰胺注射液，D组小鼠每天蒸馏水灌胃。四组小鼠均按照各自效果，为鳖甲煎丸在肝癌治疗上的

6、临床应用提供现代动物实验方案用药15d后处死，剥离肿瘤后称重，并检测肿瘤的相关指理论依据。标。1实验材料和方法1．4观察指标分别检测瘤块内的微血管计数和血管内1．1主要试验材料本研究所用120只雄性昆明种小鼠皮生长因子的水平。瘤块内微血管计数的检测方法如下：分别均由广州中医药大学实验动物中心提供，小鼠体重为18～22g。在每组小鼠瘤体的不同部位取出5个体积为5mm×5mm×随机将上述小鼠分为A组、B组、c组和D组各3O只。H22荷2mm的标本，取标本时注意避开出血部位和边缘反应区。所取瘤小鼠模型则由中山医科大学肿瘤研究所提供。本研究所用

7、的标本经过HE染色，现在4o倍显微镜下标记血管计数最高的鳖甲煎丸由武汉中联药业集团股份有限公司提供，国药准字3个区域，然后通过100倍显微镜在相应区域计数，统计每个高Z42020772，环磷酰胺注射液由江苏恒瑞医药股份有限公司提倍镜视野中的微血管计数。计算微血管数目时，对于有较厚血供，国药准字H32020856。管平滑肌或者管腔面积超过8个红细胞面积的血管忽略不计，1．2主要试剂血管内皮生长因子一抗、生物素标记兔这样可避免较大的血管影响计数的准确性。以5个部位计数抗山羊二抗均由上海安研生物有限公司提供，SABC免疫组化结果的平均值为最终

8、的微血管计数结果。血管内皮生长因子试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。水平的检测方法如下：瘤块剥离后，经过固定、脱水、浸蜡、包1．3研究方法将接种了10dH22肝癌细胞的小鼠以颈蜡、切片5个步骤处理后，