蛋白组学分析放射抗拒性鼻咽癌细胞差异表达蛋白.pdf

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1、第35卷第6期西安交通大学学报(医学版)VO1．35No．62014年11月JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences)NOV．2014◇基础研究◇蛋白组学分析放射抗拒性鼻咽癌细胞差异表达蛋白王中卫，王亚利，金迎迎，任宏涛(西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤病院放疗科，陕西西安71O004)摘要：目的筛选同一来源放射敏感性不同的鼻咽癌细胞蛋白组学差异表达，探讨鼻咽癌放射抗拒机制。方法建立放射敏感性不同的人鼻咽癌细胞株，采用双向凝胶电泳技术和图像分析软件PDQuest分离和分析不同阶段细胞间的差异蛋白质点，采用LCMS／MS质谱分析系统

2、鉴定差异蛋白质点，采用GeneOncologyAnnotation将已知差异蛋白质进行分类。部分筛选蛋白质采用Westernblot进行验证。结果CNE-2和CNE-2R细胞有差异候选差异蛋白质27个，其中11个蛋白质在放射抗拒CNE2R细胞中表达下调，16个上调。其中的4个：4-3—3a、GADD45、PRKDC和HSP27用Westernblot的方法得到了进一步确认。结论CNE一2细胞受射线反复照射产生放射抗拒性细胞，在蛋白组学水平上发生了某些突变，并将这些突变稳定的遗传下来，从而表现出放射抗拒性的表型；通过调控其中与放射抗拒性产生相关的某些蛋白表达，就有可能调控细胞的放射敏感。4

3、-3—3o、GADD45、PRKDC和HSP27是预测NPC放疗敏感性的潜在基因标志物，它们表达失调可能参与NPC放射抗拒性的产生。关键词：鼻咽癌；蛋白组学；放射抗拒性中图分类号：R739．63文献标志码：ADoI：10．7652／jdyxb201406016Proteomicanalysisofdifferentiallyexpressedproteininradi0resistancenas0pharyngealcarcinomacellsWANGZhong—wei，WANGYa—li，JINYing—ying，RENHong—tao(DepartmentofOncology，the

4、SecondAffiliatedHospital，MedicalSchoolofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710004，China)ABSTRACT：ObjectiveToobservethedifferentialgeneexpressioninhumannasopharyngealcarcinoma(NPC)celllinewithdifferentradiosensitivitvbvproteomicanalysis．MethodsWeestablisheddifferentradiosensitivitvhumannasOpharyngealcar

5、cinomacelllines，analyzedandseparatedthedifferentiallyproteinsofcellsindifferentstagesusingtwo—dimensionalgele1ectrophoresisandimagesoftwarePDQuest，identifieddifferentiallyproteinsusingLC·MS／MSspectrometrysystem，classifiedthedifferencesproteinusingGeneOntologyAnnotation．Thedifferentiallyexpressedp

6、roteinsidentifiedbyproteomicapproachwerefurtherconfirmedbyWesternblot．ResultsTotally27differentiallyexpressedproteinswerescreenedoutfromdifferentradiosensitivityCNE．2RcelllineanditsparentalCNE一2cellline，while16upregulatedproteinsinCNE·2Rcellsand11downregulatedproteinswerefound．Amongthem，4-3-3d，GA

7、DD45，GRP78andRKIPproteinswereconfirmedbyWesternblot．ConclusionTheradioresistantCNE．2RcellshavebeenisolatedfromtheCNE．2celllinebyrepeatedX—rayirradiation．TheirdysregulationmaybeinvolvedinthedevelopmentofNPCradioresistan