放射抗拒性鼻咽癌细胞系的建立及差异表达基因

《放射抗拒性鼻咽癌细胞系的建立及差异表达基因》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、放射抗拒性鼻咽癌细胞系的建立及差异表达基因：王亚利，王西京，王中卫，金迎迎，李毅【摘要】目的筛选同一放射敏感性不同鼻咽癌细胞基因差异表达，探讨鼻咽癌放射抗拒机理。方法用X射线间歇多次照射鼻咽癌细胞株E2建立放射抗拒性细胞E2R，采用BioStarH141s型基因芯片检测E2与E2R差异表达基因。结果E2和E2R细胞有差异表达的基因308条，上调176个，下调132个。在差异表达的基因中，有76个位点出现6倍以上的差异，其中36个下调、40个上调，包括与DNA修复相关、细胞周期、凋亡、细胞骨架相关蛋白、细胞增殖、代谢、蛋白质合成、信号转导、免疫相关等方面相关

2、的基因，基因分布变化较明显的主要是DNA修复相关基因、细胞骨架、细胞周期和凋亡相关基因。结论E2细胞反复照射后产生放射抗拒性细胞，在基因水平上发生了某些突变，通过调控其中相关基因，就有可能调控细胞的放射敏感性。【关键词】鼻咽癌；基因芯片；放射抗拒性　　ABSTRACT:ObjectiveToobservethedifferentialgeneexpressioninhumannasopharyngealcarcinoma(NPC)celllineicroarrayanalysis.MethodsAradioresistantcellline,E2R,ahumanna

3、sopharyngealcarcinomacellslineE2byrepeatedXrayirradiation.ThedifferentialgeneexpressionofE2andE2RicroarraybyBioStarH141sprofilegenechip.ResultsThere,thereageandrepairrelatedgenes;cellcyclerelatedandcytoskeletonrelatedproteins;andapoptosisrelatedgenes.ConclusionTheradioresistant

4、E2RcellstheE2celllinebyrepeatedXrayirradiation.Thestableradioresistanceistheresultofcoeffectbypolygeneandmultiplefactors,provingtheradiocurabilityofNPC.　　KEYRT)，图像引导的调强放疗(imageguidedradiationtherapy,IGRT)等取得了巨大的进展，但是如何克服放射抵抗性尚无理想途径。我们前期利用射线反复照射鼻咽鳞癌细胞株E2筛选出在形态学及放射生物学参数稳定的放射抗拒鼻咽癌细胞系E

5、2R[1]。在此基础上对两株细胞进行2Gy照射后利用基因芯片分析二者差异表达的基因，以期发现与放射敏感性的相关基因，进一步建立鼻咽癌辐射相关基因芯片，为探讨鼻咽癌放射抗拒机理提供理论基础。　　1材料与方法　　1.1细胞培养　　E2及E2R置于含100mL/L小牛血清、30g/L谷氨酰胺的RPMI1640培养液内，在37℃饱和湿度的培养箱内培养。　　1.2集落形成实验　　指数生长期细胞用2.5g/L胰蛋白酶+0.2g/LEDTA消化计数后制备单细胞悬液，接种于6孔板(2mL/孔)，每种细胞设6个复孔。根据不同细胞数目给予不同的照射剂量，细胞数2.0×102、2.0×1

6、02、1.0×103、1.0×104、1.0×105、1.0×106贴壁12h后分别接受6MVX射线单次剂量照射0、2、4、6、8、10Gy，将培养皿移入培养箱内，静止培养至6孔板出现肉眼可见的克隆(14～20d)。甲醇固定、Giemsa染色、低倍镜下计数所形成的集落数(≥50个细胞数的集落为有效的集落)。按照下述公式计算克隆形成率(platingefficiency,PE)=形成克隆数/种植细胞数×100%；存活分数(survivalfraction,SF)=实验组克隆形成率/对照组克隆形成率×PE。绘制剂量-存活曲线，计算照射2Gy后细胞存活分数(SF2)。　　1

7、.3照射方法　　Varian2300C/D直线加速器6MVX射线照射，源皮距100cm，剂量率2Gy/min。表面覆1cm厚组织补偿胶。取指数生长的E2及E2R细胞，2.5g/L胰蛋白酶+0.2g/LEDTA消化成单细胞悬液种植于25cm2培养瓶中，种植细胞密度为1.0×106/cm2，贴壁后6MVX射线照射2Gy，置于培养箱中继续常规培养24h用于后续研究。　　1.4基因芯片　　由上海博星基因芯片有限公司提供，型号为BioStarH141s。该芯片含有14112点的人类全长基因cDNA表达谱芯片，几乎涵盖了人类基因组的全部功能