单链抗体制备技术及应用的研究进展.pdf

《单链抗体制备技术及应用的研究进展.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、1l54ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂忐(ChinJCellMolhnmuno1)2011，27(10)文章编号：1007—8738(2011)10—1154—03单链抗体制备技术及应用的研究进展霍萍萍，张聪敏，赵宝华(河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050016)[关键词]单链抗体；研究进展；应用和一个丝氨酸(y4Ser)3的15肽序列。这是因为甘氨酸[中图分类号]Q93[文献标识码]A的分子量最小，侧链最短，可以使Linker更加柔韧，而丝氨酸有很强的亲水性，这样可以使表达出的scFv有更强

2、的生物抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的能与抗原特异性活性。seFv的连接方向可以是V。一linker—V也可以是V一1in—结合的一类血清活性成分，它可以识别和排除抗原性异物，ker—V，有的经研究证实，连接方向不影响ScFv的亲和性与对于维护体内的生理平衡和稳定起着至关重要的作用。随着表达效率，也有报道显示V}rV比Vf_V的亲和活性高10免疫学技术研究的不断深入，杂交瘤单克隆抗体(mAb)技术倍以上，但V一V的表达量比V一V高2O倍。于20世纪70年代问世，它的出现使人们大量生产特异性强、纯度高的抗体成为可

3、能，但是由于杂交瘤细胞制备技术较为2scFv的展示系统复杂，可能会在长期培养的过程中丢失抗体基因，而且应用构建好的scFv基因需要先导入展示系统中进行展示和筛于人体后容易产生人抗鼠抗体(humananti—mouseantibody，选，才能再转入表达系统中进行大量的表达。scFv可以使用HAMA)等不足之处⋯，其应用受到一定的限制。这促使人们噬菌体展示、微生物细胞表面展示、核糖体展示等多种展示继续努力，探索更为理想的抗体生产技术。近年来，基因工系统。程技术迅速发展，人们将免疫学与现代分子生物学技术结合，2．1噬

4、菌体展示噬菌体抗体库技术的出现使seFv基因的生产出重组抗体，为生物学和医学研究开辟了新的领域。其筛选过程变得更加简便和快捷。人们将scFv基因组装到丝状中单链抗体(single—chainantibody，scFv)以其在研究和应用过噬菌体中，使其与编码外壳蛋白的基因Ⅲ或基因Ⅷ相连接，程中表现出的各方面优势，正在越来越多的被人们研究和抗体基因被包装在噬菌体内部，而抗体蛋白被表达在噬菌体关注。颗粒的表面，这样就得到噬菌体抗体库，再通过淘筛，就能够得到特异性抗体基因。此项技术使表型和基因型统一体现1seFv基因的构

5、建在同一病毒颗粒之中，而且丝状噬菌体在大肠杆菌中的扩增scFv是指将抗体的重链可变区(V)和轻链可变区(V)很容易进行，这就将抗体与抗原的结合活性与噬菌体的可扩通过一个由12～25个氨基酸的组成的连接肽，首尾相接组成增性联系起来，形成了一种能够在体外模拟体内的抗体生成的单一肽链。seFv基因构建的基本步骤是：从B淋巴细胞或过程的高效筛选体系，而且噬菌体抗体库的库容较大，一般脾细胞中提取总RNA，经RT—PCR分别扩增出抗体的V和大于1×10，操作方法较简便，是scFv筛选过程中以应用最V．的编码基因，再通过一条人

6、工合成的编码寡核苷酸的接头广泛的一种方法。(Linker)将其连接成scFv基因。V和V．．基因的连接方法有2．2微生物细胞表面展示微生物细胞也可以作为scFv的两种：(1)利用酶切位点分别将V和V基因进行酶切，然展示系统，例如，蛋白质可以与通过仅一凝集素粘附受体融合后连接到带有Linker序列的表达载体中。(2)利用SOE．PCR展示在酵母菌细胞壁上，进而对scFv进行快速而精确的筛(重叠延伸PCR)技术直接将V和V基因与Linker连接起选，其他的微生物也可以用作展示系统，如大肠杆菌和苏云来，再通过酶切位点将

7、其克隆入表达载体。后一种连接方式金芽孢杆菌孢子等。与噬菌体相比，微生物细胞展示系统可更加简便快捷，是实验研究中经常采用的方法。利用SOE—以提高抗体的亲和性，减少非特异性结合，并使scFv容易产PCR技术连接V和V时，可以先扩增出V和V再用接生亲和突变。但是微生物细胞表面展示系统也存在一些缺头Linker连接在一起，构建seFv。也可以直接将接头Linker陷，它的库容较小，产量比较低，而且筛选的抗体种类也有设计在引物中，V和V．．通过Linker序列互为引物和模板，一定限制，有待进一步的研究和探索。合成完整的s

8、eFv基因。连接过程中Linker的设计十分重2．3核糖体展示运用PCR技术构建核糖体展示文库，表要，它必须能使抗体的重链可变区和轻链可变区可以自由折达产生scFv一核糖体一mRNA的复合体，与固化抗原相互作用叠，维持抗原结合位点适合的空间构象，还要尽可能减少蛋后正确表达的scFv就可以与固相抗原结合，使与抗原亲和力白酶的攻击。目前使用最为广泛的是重复出现的4个甘氨酸高s