次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选.pdf

《次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2012VOL．23NO．11时珍国医国药2012年第23卷第11期◇药理药化◇次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选裘雪梅，刘仁荣，徐玲，朱立鑫(江西科技师范学院生命科学学院，江西南昌330013)摘要：目的筛选次黄嘌呤一氨基喋呤一胸腺嘧啶(HAT)敏感型产抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞株，为双特异性抗体的制备作好准备。方法在培养瓶中培养产抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞株H6，取长到对数生长

2、期的细胞，加入1．25g／ml的8一氮鸟嘌呤，继续培养，当细胞长到60％左右时，弃去一部分细胞，加入2．5g／ml的8一氮鸟嘌呤，继续培养，重复以上操作，倍比提高8一氮乌嘌呤的含量，直至8一氮鸟嘌呤浓度达到20g／m1，取细胞上清ELISA检测其产抗体情况。结果成功诱导筛选到HAT敏感的次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞6株，均能分泌抗苏丹红I单克隆抗体。结论该方法能成功筛选HAT敏感型抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞。关键词：8一氮鸟嘌呤；次黄嘌呤一氨基喋呤一胸腺嘧啶(HAT)；杂交

3、瘤D0I标识：doi：10．3969／j．issn．1008-0805．2012．11．001中图分类号：R392．4文献标识码：A文章编号：1008-0805(2012)1】．2669-01ScreeningofHypoxanthineAminopterinandThymidine(HAT)SensitiveandAntiSu-danRedIMonoclonalAntibodyHybridomaCellQIUXue—mei，LIURen-rong，xULing，ZHULi-xin(SchoolofLifeS

4、ciences，JiangxiNormalUniversityofScience&Technology，Nanchang，Jiangxi330013，Chi—na)Abstract：ObjectiveToscreenhypoxanthineaminopterinandthymidine(HAT)sensitivecelllinesofSudanredImonoclonalantibodyhybridomabispecificantibodypreparation．MethodsCultureSudanredI

5、monoclonalantibodyhybridomacelllineH6，add1．25g／ml8azaguaninetotheculturemedium，continuetodevelop．Whencellsgrowtoabout60％，culturewith2．5g／ml8azaguanine，continuetodevelop．Repeattheaboveoperationuntiltheconcentrationof8azaguaninereached20g／ml，andthenELISAdetec

6、twhetheritcanproduceantibody．ResultsSixcellstrainsoftheHATsensitivehypoxanthineguaninephos—phoribosyltransferase(HGPRT)defectivehybridomaweresuccessfullygot，whichallsecretantiSudanredImonoclonalanti—body．ConclusionThemethodcansuccessfullyscreenHATsensitivea

7、ndantisudanImonoclonalantibodyhybridomacel1．Keywords：8一azaguanine；HAT；Hybridoma；HAT；Hybridoma二次杂交瘤是由两种杂交瘤融合或一种杂交瘤细胞与免疫室自制。脾细胞融合而成的瘤细胞，可分泌双特异性单克隆抗体，融合前DMEM，8一氮鸟嘌呤，HAT均为sigma公司产品；酶标仪关键一步是将待融合的杂交瘤细胞转变为对次黄嘌呤一氨基喋ThermoMuhiskanMK3；Costar96孔酶标板购自上海；移液枪，呤一胸腺嘧啶(HAT)

8、敏感的次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶eppendorf公司；CO培养箱，全自动洗板机购自美国Thermo(HGPRT)缺陷株，诱变常用化学试剂8一氮鸟嘌呤。苏丹红I公司。是一种化学染料，国家明令禁止在食品添加，为了能检测食品中2方法苏丹红I的含量，作者等人建立了苏丹红I直接及间接ELISA检2．1(HGPRT)缺陷株的筛选在培养瓶中培养产抗苏丹红I单测方法，3J。为了提高食品安全检测方法的精密度和准