橙皮苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用.pdf

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1、·3136·广东医学2014年10月第35卷第20期GuangdongMedicalJournalOct．2014，Vo1．35，No．20橙皮苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用冰黄文剑，陈茂剑，孙婷，李刚，聂浩，王超，张燕翔，龚权长江大学病原生物学部(湖北荆州434023)【摘要】目的探讨橙皮苷(HDN)预处理对四氯化碳(CC1)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法将30只雄性BALB／c小鼠随机分为正常组、CC1组和HDN组。HDN组灌胃HDN(500mg／kg)，CC1组和正常组灌胃同体积的0．5％羧甲基纤维素钠溶液，1次／d，连续14d。末次灌胃后禁食不

2、禁水，2h后CC1组和HDN组腹腔注射CC1(0．3％，10mL／kg)建立急性化学性肝损伤模型，正常组注射相同体积的橄榄油。16h后按指标检测要求保留标本。测定各组小鼠肝、脾指数，肝组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的水平，血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子一(TNF—)、白细胞介素一6(IL一6)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平；HE染色观察组织病理学改变；RT—PCR法检测小鼠肝组织HMGB1mRNA的表达水平。结果与正常组比较，CC1组血清中ALT、AST水平显著升高(P<0．01)，肝细胞水肿

3、，脂肪变性，结构紊乱，肝细胞明显肿胀变形，有点状、片状坏死及炎性细胞浸润，MDA含量明显升高(P<0．01)，SOD和GSH活性明显降低(P<0．o1)，血清中TNF一0【和IL一6的水平显著升高(P<0．01)，HMGB1的表达与释放明显增强(P<0．01)。与CC1组比较，HDN组血清中ALT、AST水平显著降低(P<0．01)，肝组织损伤程度明显减轻，MDA含量明显降低(P<0．01)，SOD和GSH活性明显升高(P<0．01)，TNF一0l和IL一6水平显著降低(P<0．01)，HMGB1的表达与释放受抑制(P<0．01，P<0．05)。结论HDN对CC1所致小鼠

4、急性肝损伤具有保护作用，其机制可能与抑制脂质过氧化，减少TNF—d及IL一6的产生以及抑制HMGB1的表达和释放有关。【关键词】橙皮苷；急性肝损伤；肿瘤坏死因子一；白细胞介素一6；高迁移率族蛋白B1病毒性肝炎、药物性肝损害、自身免疫性肝炎、肝周龄，体重l8～22g；HDN(临用前用0．5％羧甲基纤维硬化及肝癌等肝病已成为世界范围内危害人群健康的素钠配成悬浊液)(Sigma公司)；CC1(临用前溶于橄主要疾病之一。橙皮苷(hesperidin，HDN)是橙皮素与榄油)(北京化学试剂公司)；谷丙转氨酶(ALT)和谷芸香糖形成的糖苷，为二氢黄酮衍生物，具有抗脂质过草转氨酶(AS

5、T)试剂盒(四川迈克生物科技股份有限氧化及清除氧自由基、抗炎和免疫调节作用。目公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱前国内外相关研究证实，HDN可以保护四氯化碳甘肽(GSH)和考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成(CC1)所致的急性肝损伤，机制主要包括：清除氧自由生物工程研究所)；TNF一和IL一6试剂盒(欣博盛生基、稳定细胞膜结构，抑制脂质过氧化反应，但关于物技术有限公司)；HMGB1试剂盒(伊莱瑞特生物科技细胞因子和炎症介质在HDN对急性肝损伤保护当中有限公司)；TRIzol试剂(Invitrogen公司)；总RNA提的作用报道少见。2012年10月至

6、2013年12月，本实取试剂盒(天根生化科技有限公司)；RT～PCR试剂盒验用CC1诱导，建立急性化学性肝损伤模型，在既往(宝生物工程有限公司)；HMGB1的PCR引物(上海生研究基础上，进一步观察HDN对炎性细胞因子肿瘤坏工生物工程技术服务公司)。死因子一(TNF一0【)和白细胞介素一6(IL一6)以及1．2动物分组与干预30只小鼠适应性喂养1周后，炎症介质高迁移率族蛋白B1(highmobilitygrouppro—参照文献[5]，随机分为3组：正常组、CC1组和HDN组，每组10只。HDN组灌胃HDN(500mg／kg)，CC1teinB1，HMGB1)的影响，继续

7、探讨HDN对CC1所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及其机制，为急性组和正常组灌胃同体积的0．5％羧甲基纤维素钠溶液，1次／d，连续14d。末次灌胃后禁食不禁水，2h后化学性肝损伤的治疗提供新的理论依据。CC1组和HDN组腹腔注射CC1(3％，10mL／kg)，正l材料与方法常组注射相同体积的橄榄油。16h后按指标检测要求1．1动物及实验材料BALB／c小鼠[由武汉大学动保留标本。物实验中心提供，合格证：SCXK，(鄂)2008—0004]，81．3小鼠肝和脾指数小鼠取血后立即颈椎脱臼处死，取肝脏，用4~C生理盐水冲洗，滤纸吸