积雪草苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用研究论文

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1、积雪草苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用研究论文张丽娜，郑佳佳，李晓会，吴孟娇，张力，万敬员【摘要】目的研究积雪草苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。方法建立盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的小鼠脓毒症致急性肝损伤模型，随后用不同剂量的积雪草苷(15.freelg/kg)干预，24h后检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase，AST)、肿瘤坏死因子-alpha(tumor

2、necrosisfactoralpha，TNF-α)的含量;免疫印迹法检测肝组织中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的表达，并取部分肝组织进行组织病理学分析。结果积雪草苷剂量依赖性地减少脓毒症诱导的血清中ALT、AST及TNF-α的升高，抑制肝组织中COX-2蛋白的表达，病理切片显示积雪草苷组肝组织受损程度较模型组为轻。结论积雪草苷对CLP诱导的肝损伤具有一定的保护作用，其机制可能与抑制炎症介质COX-2和TNF-α有关。【关键词】积雪草苷;脓毒症;盲肠结扎穿孔;急性肝损伤;环

3、氧合酶-2Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectandmechanismofasiaticosideonsepsis-inducedacuteliverinjuryinmice.MethodsSepsis-inducedacuteliverinjuryice.Subsequently，differentdosesofasiaticoside(15mg/kg，45mg/kg)alanineaminotransferase(ALT)，aspartateami

4、notransferase(AST)andtumornecrosisfactoralpha(TNF-α)levelseasured，inecyclooxygenase-2(COX-2)expressioninlivertissuesandhistopathologyexaminationedbyhematoxylin-eosin(HE)staningmethod.ResultsTheresultsshoALT，ASTandTNF-αlevels，inhibitedCOX-2expressioninliv

5、ertissues，andhistopathologicalchangesofliverprovedbyasiaticosideasparedtomodelgroup，andtheseeffectsechanismisprobablyassociatedandCOX-2expressioninlivertissues.KeyultiorgandysfunctionsyndromeMODS)已成为当今外科重症监护病房中的首要死亡原因之一。据统计，全球每年有600000例脓毒症患者死亡1，其死亡率高达50%

6、。在脓毒症发展过程中，肝脏是最易受损的器官之一。脓毒症患者出现肝功能异常是其病情加重的标志。因而，寻求脓毒症诱发的急性肝损伤的有效防治途径成为危重病医学亟待解决的问题。积雪草苷(Asiaticoside)为积雪草提取物三萜皂苷的主要成分之一2，3，具有促进伤口愈合、抗溃疡、抗炎等作用4，临床上用于治疗慢性炎症、皮肤病等5。本实验针对积雪草苷对炎症有效的特点，利用经典的小鼠盲肠结扎穿孔(Cecalligationandpuncture，CLP)模型，研究积雪草苷对脓毒症诱发的急性肝损伤是否具有治疗作用并初

7、步探讨其作用机制。1材料1.1药品与试剂积雪草苷(纯度95%，无色结晶，分子式：C48H78O19，相对分子量：959.15)，由广西昌洲天然植物开发有限公司提供，批号20060205;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;小鼠TNF-αELASA检测试剂盒(德国Bender公司);BCA蛋白定量试剂盒(pierce公司);诱导型环氧合酶2(COX-2)抗体(Abcam公司)。1.2动物及分组成年昆明小鼠，体质量18～22g，40只健康小鼠，♂♀

8、各半重庆医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(渝)20070001,.freelg/kg)，每组10只。2方法2.1CLP动物模型的制作6，7行CLP手术之前1h，假手术组与模型组给予等体积生理盐水，积雪草苷组腹腔注射对应剂量药物。造模方法：动物在实验前1d禁食，0.3%的戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉，于小鼠腹正中线做一长约1cm切口，找出盲肠并结扎其根部，保留血供，选用8号针头穿刺已结扎盲肠1次，挤出肠内容物