斑点叉尾天然单链（ScFv）噬菌体抗体库的构建及初步鉴定.pdf

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1、第5O卷第24期湖北农业科学Vo1．50No．242011年12月HubeiAgriculturalSciencesDec．，2011斑点叉尾鲴天然单链(ScFv)噬菌体抗体库的构建及初步鉴定王辉．邹世平(1．华中农业大学水产学院，武汉430070；2．中国水产科学研究院长江水产研究所，武汉430223)摘要：以健康未经免疫的斑点叉尾鲴为试验材料，取其新鲜外周血，分离淋巴细胞，提取总RNA，逆转录合成cDNA。PCR扩增重链Fd和轻链cDNA．以纯化的VH、VL基因为模板，以与VH基因3'-端和VL基因一5端序列互补的Linker—Prime

2、rMix为引物，将VH、VL随机拼接为ScFv。通过酶切连接，依次将PCR产物插入质粒p3MH相应位点．热激法转化大肠杆菌XL1一Blue，加入辅助噬茵体VCSM13，构建噬茵体单链抗体库测定库容并酶切鉴定。斑点叉尾鲴天然单链(ScFv)噬茵体抗体库成功构建为进一步筛选特异性抗体及从斑点叉尾鲴病变组织中提取特异性抗原用于免疫治疗奠定了基础。关键词：斑点叉尾鲴：抗体库：噬茵体展示；抗体单链(ScFv)中图分类号：Q959．46+8文献标识码：A文章编号：0439—8114(2011)24—5239—03ConstructionandPrelim

3、inaryIdentificationofSingle-chainAntibolyLibraryofNaturalPhageinChannelCatfish，letaluruspunetausWANGHui1,ZOUShi-ping。(1．CollegeofFisheries，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China；2．YangtzeRiverFisheriesReserchInstitute．ChineseAcademyofFisherySciences，Wuhan430223，Ch

4、ina)Abstract：Peripheralbloodlymphocyteswereisolatedfrom250mLblood，whichwasobtainedfrom50non—immunnizedhealthychannelcatfishthroughtheirvenaeaudalis．TheheavychainFdandlightchaincDNAsynthesizedfromthetotalRNAoflymphocyteswerePCRamplifiedandtheamplificationproductswerecompacte

5、dbyLinker-PrimerMixintoScFv．Thentheamplificationproductswereligatedsuccessivelyintothephagemidvectorp3MH，thentheligatedsamplewastransformedintocompetentEcoliXL1-Blue．ThetransformedcellswereinfectedwithVCSM13helperphagetoyieldrecombinantphageScFvantibody．Thesuccessfulconstru

6、ctionofnaivechannelcatfishphageantibodylibrarycreatedfavourableconditionsforselectingspecificphageantibodyandabstractingspecificantigen．Keywords：IctaluruspunctatusRafinesque；antibodylibrary；bacterialphage；ScFv斑点叉尾鲴UctaluruspunctatusRafinesque)亦于治”的原则称沟鲶(Channelcatfish)，属于鲶形

7、目(Silurifotines)噬菌体抗体是指采用基因克隆技术将B细胞鲴科(Ietaluridae)鱼类。主要分布于美国中部、加拿全套可变区基因克隆出来．通过与噬菌体衣壳蛋白大南部和大西洋沿岸的部分地区。斑点叉尾鲴是水基因连接．以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面的产养殖业中最为重要的养殖鱼种之一．自20世纪抗体分子用B淋巴细胞全套抗体可变区基因克隆80年代引进我国以来养殖规模不断扩大．出口量也并组装成的噬菌体群体称为噬菌体抗体库[1]该技在逐年上升。但是由于斑点叉尾鲴种质资源退化严术克服了单克隆抗体杂交瘤细胞中抗体不稳定、容重，养殖技术较低，养

8、殖环境恶化等原因．导致人工易丢失的弊端，直接利用抗原从抗体库中筛选特异养殖的斑点叉尾鲴病害频发．给养殖业带来巨大损性抗体]。本实验室采用未经免疫的健康斑点叉尾失。斑