不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf

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1、64·主堡塞坠I病毒学盘查14年2月_28卷第1期ChineseJExpClinVirol，February2014，Vo1．28，No．1技术方法．不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响李红敏，任慧，郝晓花，黄玉波，魏红山【摘要】目的比较不同的分离介质对小鼠原代肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)分离纯化效率的差异。方法肝门静脉原位灌注，预灌注不含钙镁离子的D—Hanks液及含有Ⅳ型胶原酶的灌注液，取消化后的肝脏，分别采用Ficoll—PaquePLUS、Percoll、Nycodenz

2、作为分层介质，密度梯度离心纯化原代HSCs。显微镜下观察细胞纯度并计算细胞得率。锥虫蓝染色判断细胞活率。激光共聚焦显微镜观察原代HSCs的固有荧光情况。油红O染色观察获得原代HSCs的纯度情况。结果采用Ficoll—PaquePLUS、Percoll、Nycodenz分离细胞得率分别为(1±0．5)×10。，(1±0．5)×10，(0．8±0．5)×10；纯度分别为75％～85％，91％～95％，91％一95％；活率均高于90％。结论用Nycodenz作为分离介质分离肝星状细胞的方案最优。【主题词】肝硬化；细胞，培养的；细胞／分

3、离和提纯；小鼠TheperformanceofdiferentisolationregentsforpurificationofmiceprimaryhepaticstellatecellsLiHongmin，RenHui，HaoXiaohua，HuangYubo，WeiHongshan．BeijingDitanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beng100015，ChinaCorrespondingauthor：WeiHongshan，Email：drwei@ccmu．edu．cn【Abst

4、ract】0bjectiveTocomparetheadvantagesanddisadvantagesofthethreeisolationregentsforisolatingprimaryhepaticstellatecells(HSCs)ofmice．MethodsThemiceHSCswasisolatedbyinsituperfusionofper—perfusionsolution，perfusionwithcollagenaseIV．Afterdigestion，Ficoll—PaquePLUS，percolla

5、ndNycodenzwereuseforthegradientcentrifugation．Tocalculatethequantity，purityandtheviabilityoftheHSCs．TheautofluorescenceandOilOstainingwereusedtoidentifyprimaryHSCs．ResultsThequantityofHSCswas(1．0±0．5)×10。，(1．0±0．5)×10，(0．8±0．5)×10。／g—liver，respectively．UsingFicoll—Pa

6、quePLUS，percollandNycodenz，thepurityofprimaryHSCswere75％一85％，91％·95％，91％一95％，respectively．Theviabilitywereallabove90％．ConclusioncomparedwithFicoll—PaquePLUSandpercoll，theNycodenzisthethebestseparatingmediumforisolationandpurificationofmiceprimaryHSCs．【Keywords】Liverc

7、irrhosis；Cells，cultured；Cells／isolationandpurification；Mice肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)，是肝内种不同介质分离小鼠HSCs的性能进行了比较分的一种非实质细胞，占肝细胞的5％～8％，分布于析，结果显示，与其他分离介质相比，Nycodenz具有肝脏的Disse隙内，是合成、分泌细胞外基质的主要较好的分离纯化性能。来源。HSCs活化产生的细胞因子导致肝脏细胞外1材料与方法基质降解和胶原纤维增加是肝纤维化发生、发展的主要原因。因此，原代HSCs的分

8、离、培养也就成为1．1材料Ficol1．PaquePLUS、Percol1分离介质肝纤维化发病机制研究的关键。但与大鼠HSCs相(GEHeahhcare公司)，以及Nycodenz(Axis—shield公比，小鼠原代HSCs分离纯化更为困难。我们对几司)按照制