大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞的同步分离与培养-论文.pdf

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1、·532·doi10．3969~．issn．1673—4254．2014．04．20JSouthMedUniv,2014，34(4)：532—537基础研究大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞的同步分离与培养李洋，蔡双明，张莉莉，李旭南方医科大学南方医院急诊科，广东广州510515摘要：目的探索和建立同步分离大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞和肝窦内皮细胞，并进一步鉴定和培养的方法。方法联合应用原位灌注、离体灌注、梯度密度离心和差速贴壁等分离方法，获取4种大鼠肝内原代细胞，采用形态学观察、免疫荧光染色和墨汁吞噬实验等方法对所分离

2、的各种原代细胞进行纯度鉴定。结果通过原位灌注结合离体灌注、密度梯度离心结合差速贴壁等分离手段，成功实现了大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞以及肝窦内皮细胞的同步分离，且所得原代细胞得率、活力及纯度等指标均符合后续细胞实验要求。结论通过简易方法同步分离大鼠原代肝细胞、星状细胞、枯否细胞以及肝窦内皮细胞是可行的。关键词：原代培养；肝细胞；星状细胞；枯否细胞；肝窦内皮细胞；原位灌注；密度梯度离心SimultaneousisolationandprimarycultureofrathepatocytesfhepaticstellatecellslK

3、upffer’ScellsandhepaticsinusendothelialcellsLIYang,CAIShuangmin~ZHANGLili,LIXuDepartmentofEmergencyMedicine,Na咖ngHospital，SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,ChinaAbstract：ObjectiveToestablishamethodforsimultaneousisolationandprimarycultureofrathepatocytes,hepaticste

4、llatecells,Kupffer’Scellsandhepaticsinusendothelialcells．MethodsBycombining协situperfusion,invitroperfusion，densitygradientcentrifugationanddifferentialadhension,primaryrathepatocytes,hepaticstellatecells,Kupffer’Scellsandhepaticsinusendothelialcellswereobtained．Thepurityof

5、thesecellswereassessedwithmorphologicalobservation,immunofluorescentstainingandinkphagocytosisassa~ResultsWesuccessfullyobtainedthe4primarycellssimultaneouslybycombininginsituperfusionwithinvitroperfusion,densitygradientcentrifugation,anddifferentialattachment．Thecellyield

6、rate，cellviabilityandpurityallmetrequirementsforthesubsequentcellexperiment．ConclusionThecombinedcellisolationandculturemethodisfeasibletoisolateprimaryrathepatocytes，hepaticstellatecells，Kupffer’Scellsandhepaticsinusendothelialcellssimultaneously．Keywords：primaryculture；h

7、epatocytes；hepaticstellatecells；Kupffer’Scells；hepaticsinusendothelialcells；insituperfusion；densitygradientcentrifugation肝脏的主要细胞构成为上皮细胞(肝细胞、胆管上胞分离手段，通过一次分离获取多种肝内原代细胞皮细胞)及问质细胞(肝窦内皮细胞、枯否细胞、星状细具有重要意义。笔者参阅国内外文献，结合多次试验摸胞、间皮细胞、血管平滑肌细胞、隐窝细胞、神经细胞索，总结出一套实用、稳定而高效的分离方法，归纳报道等)⋯。目前的研究热

8、点集中于肝细胞、肝窦内皮细胞、如下。枯否细胞和星状细胞。在大鼠体内，上述4种细胞各自的原代分离、鉴定和培养方法已有大量文献报道。近1材料和方法年来，随着人们对肝脏生理病理机制研究