原发性肝细胞癌患者外周血AFPmRNA检测的临床意义-论文.pdf

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1、·76·福建医药杂志2014年2月第36卷第1期FujianMedJ，February2014，Vo1．36，No．1·实验诊断与临床·原发性肝细胞癌患者外周血AFPmRNA检测的临床意义福建医科大学附属南平第一医院普外科(南平353000)柏凯梁平【摘要】目的探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者外周血甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPrnRNA)的检测对肝癌微转移的诊断价值。方法运用巢式RT—PCR技术检测肝细胞癌(A组)39例、肝炎和肝硬化(B组)19例、肝血管瘤(C组)1O例、转移性肝癌(D组)10例、健康

2、志愿者(E组)19例外周血AFPmRNA水平。结果A组外周血AFPmRNA检出率为53．8％。Ⅲ期、Ⅳ期和工期、Ⅱ期比较，患者AFPmRNA阳性率逐渐提高。当肝癌直径大于5cm、多结节、伴门静脉癌栓、肝外转移，AFPmRNA检出率明显提高；而血浆甲胎蛋白水平、肝癌分化程度等AFPmRNA的检出率无明显关系(P>0．u)。B组AFPmRNA检出率为10．5(2／J9)；C、D、E组均未检出AFPmRNA。结论巢式RT—PCR技术检测肝细胞癌(HCC)患者外周血的AFPmRNA是发现肝癌微转移的可靠方法。【

3、关键词】原发性肝细胞癌；AFPrnRNA；微转移【中图分类号11R735．7【文献标识码】B【文章编号】1002—26O0(2014)01—0076—03原发性肝细胞癌(HCC)是我国常见的恶性肿分离：采用聚蔗糖一泛影葡胺密度梯度离心法。3)瘤之一，我国肝癌的发病率已位居恶性肿瘤的第2细胞总RNA提取：根据Trizol说明书，按照异硫位，死于肝癌的人数每年约有2O万人，上升到恶氰酸胍法提取细胞总RNA。4)PCR引物：AFP性肿瘤病死率的第2位。肝癌的最有效的治疗手段mRNA外引物序列如下(扩增产物长度

4、为176bp)，是手术切除和肝移植；但肝癌根治性切除术后5年EX—seFIse．5一ACTGAATCCAGAACACTGCATAG一3；EX—antisense，5r_TGCAGTCAA复发率高达80，小肝癌术后复发率也达40％～TGCATCTTTCACCA一3。AFPmRNA内引物50l1；肝癌患者肝移植术后5年生存率低于3O％～40_2]序列如下(扩增产物长度为101bp)：IN—Sense，5。近年来，检测肿瘤患者外周血微转移成为TGGAATAGCTTCCATATTGGATTC一3；研究的热点，具

5、有高敏感性的RT—PCR对于实体瘤IN～antisense．5一AAGTGGCTTCTTGAACAA的检测日趋成熟。本研究检测外周血AFPmRNA，ACTGG一3。探讨该标志物检测对肝癌微转移的诊断价值。1．3统计学分析：采用SPSS10．0软件进行分析。1材料与方法计数资料比较采用。检验，P<0．05为差异有统1．1一般资料：选择2004年3月至2005年12月计学意义。就诊的原发性肝细胞癌患者(A组)39例、肝炎2结果和肝硬化患者(B组)19例、肝血管瘤患者(CA组外周血AFPmRNA检出率为53．

6、8(21／组)10例、转移性肝癌患者(D组)10例、健康39)。在TNM分期中的分布是：工期20(1／5)；志愿者(E组)19例，各疾病诊断均经组织学或影Ⅱ期33．3(3／9)；lI期57．9(11／19)；IV期像学证实，实验操作同期进行。39例HCC患者100％(6／6)。1]／期、Ⅳ期和工期、Ⅱ期比较，患中，男33例，女6例，年龄3O～72岁(49岁)。者AFPrnRNA阳性率逐渐提高。当肝癌直径大于5HCC患者TNM分期，伴门静脉癌栓、肝外转移情cm、多结节、伴门静脉癌栓、肝外转移，AFPmR—

7、况，肿瘤直径、数目、分化程度等见表1。转移性NA检出率明显提高。而血浆甲胎蛋白水平、肝癌肝癌的原发灶分别是直肠癌(4例)、结肠癌(3分化程度等AFPmRNA的检出率无明显关系(P>例)、胃癌(2例)、胆管癌(1例)。0．05，表1)。B组AFPmRNA检出率为10．5oA1．2方法：运用巢式RT—PCR技术检测患者和健(2／19)，C、D、E组均未检出AFPmRNA(表2)。康志愿者外周血AFPmRNA水平。1)标本采集：3讨论受检者外周静脉血5mL并肝素抗凝。2)单核细胞所谓微转移是指用常规病理学方法

8、不能检出的1第三军医大学新桥医院肝胆外科福建医药杂志2014年2月第36卷第1期FujianMedJ，February2014，Vo1．36，No．1·77·表1肝癌患者外周血AFPmRNA阳性率与各临床参数的关系普通RT-PCR提高了10～100倍，并且特异性更高，该技术的成熟使早期发现肝癌外周血微转移灶成为可能。本研究中肝细胞癌患者外周血中AF—PmRNA的阳性率为53．8。本文结果提示，肝细胞癌患者外周血中AF—PmRNA的检出率53