凹土玉米芯垫料对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响-论文.pdf

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1、^，第3O卷第4期实验动物科学Vo1．3ONO．42013年8驴痧月告报究研驴LAB0RAT0RYANIMALSCIENCEAugust2013凹土玉米芯垫料对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响舒畅张延英吴建军陶维天蔺兴遥朱建坤康万荣李存祥(1．甘肃中医学院，兰州730000)(2．甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，兰州730000)(3．甘肃省高校中藏药化学与质量研究省级重点实验室，兰州730000)摘要：目的观察凹土玉米芯垫料对大鼠肝脏细胞色素P450(CytP450)、细胞色素b5(Cytb5)含量及大鼠肝微粒体CYPIA2和CY

2、P2E1活性的影响。方法将SD大鼠随机分为普通刨花组、玉米秸组、凹土玉米芯组和对照组，饲养30d、60d、90d时测定大鼠肝脏微粒体CytP450、Cytb5的含量和CYP1A2，CYP2E1活性。结果60—90d时普通刨花组、玉米秸组与空白对照组之间CytP450含量有显著性差异(P<0．05)，凹土玉米芯组与对照组之间没有显著性差异(P>0．05)；肝微粒体Cytb5含量、CYP1A2、CYP'2E1活性各组均没有明显差异(P>0．05)。结论凹土玉米芯对大鼠肝脏细胞微粒体CytP450、Cytb5、CYP1A2和CYP2E1没有诱导或

3、抑制作用，普通刨花组对大鼠肝CytP450有较强的诱导作用，玉米秸也有不同程度的诱导作用，但低于普通刨花的诱导作用。关键词：凹土玉米芯；垫料；细胞色素P450；诱导作用中图分类号：Q95—33文献标识码：A文章编号：1006—6179(2013)04031-04目前，国际上对实验动物垫料没有明确、统一的购自甘肃I临泽，含水量≤12％，凹土玉米芯加工成约质量标准，在我国还没有针对实验动物垫料制定的2cm×2cm×0．5em的碎片。普通刨花垫料：购自强制性实施的相关标准⋯，国内实验动物垫料常用甘肃省兰州市雁滩家具市场木器加工厂混合型刨的是木质刨

4、花，但由于其来源不够稳定，有些木材含花，规格大小不相同。玉米秸：2cm×1．5cm×0．5脂溶性可挥发性物质，可以诱导动物肝脏微粒体酶cm，购自兰州市榆中县农村。的活性改变，从而影响实验结果，其中的一些物质对1．2实验动物及模型实验动物具有毒性作用导致了实验误差，严重影响由甘肃中医学院实验动物中心提供SPF级实了某些实验尤其是药理学和毒理学实验结果的准确验动物和屏障环境动物实验室，许可证号分别为性。鉴于实验动物垫料是影响实验动物质量和SCXK(甘)2011—0001和SYXK(甘)2011—0001；动物实验结果重要的环境因素，为此，我们用

5、凹SPF雄性SD大鼠120只，体质量120—160g，不加土和玉米芯配方开发出了新型实验动物垫料，任何垫料，在漏底带粪盘笼具内饲养30d，然后随机本实验比较了普通刨花、玉米秸和凹土玉米芯垫料分为4组，每组3O只，每组分6笼饲养，分别使用普对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1活性和CytP450通刨花、玉米秸、凹土玉米芯垫料，对照组不加垫料。酶系的诱导作用，为开发新型垫料凹土玉米芯提供每周更换垫料2次，分别于饲养30d、60d、90d后实验依据。从每组随机抽出1O只取血后处死。1．3仪器与试剂1材料和方法紫外分光光度计(日本岛津公司，uV

6、一2401PC)，低温高速离心机(美国科峻仪器公司，1．1动物垫料Biofugefresco)；牛血清白蛋白(BSA)、考马斯亮凹土玉米芯垫料：玉米芯、凹土(又称坡缕石)蓝蛋白测定试剂盒、蛋白标准品(南京建成生物工收稿日期：2013—06—17基金项目：2009年甘肃省技术研究与开发专项计划项目(No．0912TCYA032)作者简介：舒畅(1978一)，女，硕士，从事实验动物教学和科研工作。E—mail：chshu402@163．eom通信作者：张延英(1964一)，男，硕士，从事实验动物教学及动物模型制作与实验动物支撑条件相关研究。E-

7、mail：zyy@gszy．edu．cn·32·实验动物科学程研究所)、其他试剂为国产分析纯。CYP2E1的特异性代谢底物，在体外与肝微粒体共1．4肝微粒体制备孵化，通过HPLC—uV方法，测定孵化反应体系中代股静脉取血用于血液生化指标及其他项目检谢物对乙酰氨基酚的浓度，计算对乙酰氨基酚的生测，大鼠放血后颈椎脱臼处死，取出肝脏并称其质成速率，测定所试物对大鼠肝微粒体CYP1A2活性量。以下操作均在冰水浴中进行，用预冷的生理盐的影响；测定代谢物6一羟基氯唑沙宗的浓度来计水反复冲洗肝脏，洗净血污，将肝脏剪碎约2mm算6一羟基氯唑沙宗的生成速率，

8、测定所试物对大小，加入4倍于肝湿重的0．25tool·L蔗糖溶CYP2E1活性的影响。液，用手动玻璃匀浆器制成匀浆液。制备的肝匀浆1．6数据统计分析在4℃下10000g离心20m