垫料物质的细胞毒性及其对大鼠肝脏细胞色素P450酶系诱导作用的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文垫料物质的细胞毒性及其对大鼠肝脏细胞色素P450酶系诱导作用的研究姓名：王春梅申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：刘福英2003.3.1中文摘要垫料物质的细胞毒性及其对大鼠肝脏细胞色素P450酶系诱导作用的研究摘要目的：垫料物质(beddingmaterial)与实验动物机体直接接触，如果垫料选用不当，会对动物健康与实验结果产生极大的影响。由于不同垫料在细胞毒性和酶的诱导作用方面有很大的变异，尽管饲料和其它环境因素做到标准化，在不同实验室同基因型的动物品系对化学物质和药物的生物反应可有很大不同。欧美等发达国家

2、和地区实验动物生产普遍使用低毒、标准化的商品垫料，而我国实验动物垫料的使用极不规范，多数单位都在使用毒性较大的松木刨花垫料。长期以来，许多实验动物研究人员没有对这个问题加以重视。随着我国实验动物工作的迅速发展，实验动物垫料的标准化和新型垫料的开发已经被重视。本研究拟通过实验，选择一种较为理想的用于实验动物垫料物质细胞细胞毒性研究的细胞系，并对几种垫料物质的细胞毒性以及对大鼠肝细胞色素P450酶系诱导作用进行研究，可以为开发原料来源丰富，成本低廉，低毒无害的适合我国国情的标准化实验动物垫料提供实验依据。材料与方法：体外实验：本实验用丙酮作为抽提溶剂，提

3、取5种不同垫料物质即松木、玉米秸、麦秸、玉米芯和国外商品垫料中的毒性物质，比较了KM小鼠的皮肤成纤维细胞、S180。s：D9瘤细胞株和H：：．H：D8瘤细胞中文摘要栋砖垫辩物质嚣酮提取物的敏感矬，选择塞一瓣比较敏感的细胞系H22"H2D。；采用考马斯亮兰法和MTT法，测定船入不同浓度的5萃孛垫籽丙酮撬淑耪螽逸：一氆纨细脆的细胞总蛋白量和光密度值(OD∞：)，并计算细胞的存活率、穰对生长率(RGR)和垫料物质的半数致死懿(LD，。)，对5种垫料物质的细胞毒性大小进行了比较和分级。整体动物实验：将雄性SD大鼠不加任何垫料饲养3周，然稀随机分为4组，分别为

4、松木组，玉米秸组，麦秸组和空白对照组，分别于饲养1、2、3和4闵后处歹E动物，用全自动生化分析仪测定衄液中的谷丙转氨酶(GPT)、自蛋白(ALB)翻总蛋囱(TP)，分光光度计测定肝脏微粒体细胞色素P450酶、细胞色素b5酶、NADPH．细胞色素C还原黪，毙鞍3种垫料物矮对大鼠血液生化指标的影响和对细胞色素P450酶系的诱导作耀。结果：1．垫料细胞毒性实验细胞系的选择和5种垫料物矮细胞毒性豹比较。1．1垫料细胞毒性实验细胞系的选择。分别以H：2．H2Ds缨耱、S1,o-S2D》缨施积KlVl小鬣的皮获成纤维纲脆的存活攀对不同垫料物质的两酮提取物浓度作曲

5、线圈，在l～40mg／ml的垫料物质籀取物的浓度范围肉，碣i。H。D。细胞可以显示除援米芯外的其余4种垫料物质的LD∞，著鲢细胞撵活率随提取物浓度的交纯趋势眈较硝显。s，∞一s：D9细胞仅能显示松木和商品垫料豹L￡)柏，其余三组的王D劬均不能踅示。K／vl小鼠的皮肤成纤维细臆中文摘要只能显示松木的LD，。，其余各组的LD50均不能显示且变化趋势不明显。1．25种垫料物质细胞毒性的比较和分级。5种垫料物质的LD50分别为：松木的LD50<5mg／ml，麦秸、玉米秸、国外商品垫料的LD50<20mg／ml，玉米芯的LDso>40mg／ml。在1～40mg

6、／ml浓度范围内，麦秸和商品垫料的细胞毒性为2．3级，松木的细胞毒性最高为5级，玉米秸的细胞毒性为1．3级，玉米芯的细胞毒性为1—2级。对麦秸、玉米秸和商品垫料三者之间相互比较，在垫料提取物浓度≤3mg／ml时，三者无统计学差异(P>0．05)；浓度为5～10mg／ml时；麦秸与玉米秸和商品垫料相比有差异(P<0．05)，玉米秸和商品垫料之间相比无差异(P>0．05)；在浓度为20mg／ml和40mg／ml时，麦秸和商品垫料与玉米秸有统计学差异(P<0．05)，麦秸和商品垫料之间相比无差异(P>0．05)。2．3种垫料物质对大鼠血液生化指标的影响和细

7、胞色素P450酶系诱导作用。2．13种垫料物质对大鼠血液生化指标的影响。3个实验组与对照组的GPT、ALB和TP值相比，在1～4周内无统计学差异(P>0．05)，且在正常范围之内。2．23种垫料物质对细胞色素P450酶系的诱导作用。与对照组相比较，3种垫料物质均表现一定程度的诱导作用。松木在2、3、4周对雄性大鼠的细胞色素P450酶有显著诱导作用(P

8、作用(P<0．05)。麦秸在第2、3周可以诱导细胞色素P450酶和细胞色素b5酶的活性显著增加(P<0．05