抑制Eph受体酪氨酸激酶A7基因对肝癌细胞SMMC-7721生物学特性的影响-论文.pdf

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1、·1712·2014年8月第31眷第8期ChinJExpSu瑗，August2014，Vo1．31，No．8·实验研究-抑制Eph受体酪氨酸激酶A7基因对肝癌细胞SMMC一7721生物学特性的影响张弓李功权吴阳唐哲赵永福张水军【摘要】目的观察RNA干扰抑制Eph受体酪氨酸激酶A7(EphA7)基因对肝癌细胞株SMMC-7721生物学特性的影响。方法EphA7小干扰RNA重组质粒采用脂质体介导法转染肝癌细胞株SMMC-7721，并设空载体转染组和未转染组。采用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)和Westernblot法检测转染干扰载体后肝癌细胞株

2、SMMC-7721中EphA7mRNA和蛋白的表达，噻唑蓝(MTF)比色法检测转染后细胞增殖能力的变化，流式细胞仪检测转染后细胞周期分布的改变，Transwe11小室侵袭实验检测转染后对其体外侵袭能力的影响。结果与空载体转染组(0．4293±0．0533、0．5822±0．0291)和未转染组(0．4311±0．0410、0．5832±0．0154)比较，EphA7小干扰RNA(siRNA)可显著下调肝癌细胞株SMMC-7721中EphA7mRNA(0．1911±0．0153、0．1488±0．0199和0．0874±0．0123)和蛋白(0．2786±0．

3、0392、0．3011±0．0372和0．2142±0．0147)的表达(P<0．05)。M1Tr法绘制生长曲线显示，转染组肝癌细胞株SMMC一7721增殖速度明显低于空载体转染组和未转染组(P<0．05)。流式细胞检测结果显示EphA7siRNA对肝癌细胞株SMMC-7721生长周期中G、G，和s期的细胞分布比例无明显影响(P>0．05)。Transwell小室侵袭实验发现，转染组肝癌细胞株SMMC-7721穿膜细胞计数[(27．00±5．57)、(13．40±3．43)和(23．604-3．65)个]明显低于空载体转染组[(68．60±6．50)个]和未

4、转染组[(72．00±9．30)个]，差异有统计学意义(P<0．05)。结论抑制EphA7基因可降低肝癌细胞株SMMC-7721的增殖活性及体外侵袭能力，EphA7可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用。【关键词】癌，肝细胞；转染；RNA干扰；Eph受体酪氨酸激酶A7；基因疗法EfectsofRNAinterferencetargetingEphreceptortyrosinekinaseA7geneonthebiologicalbehav·iorofSMMC-7721hepatomacelllineinvitroZhangGong，LiGong

5、quan，Yang，TangZhe，Zhaoy0n，ZhangShuqun．DepartmengofHepatobiliary&PancreaticSurgery，theFirstAffiliated月D—talofZhengzhouUniversity．Zhengzhou450052．C^inaCorrespondingauthor：ZhangShuqun，Emaif：zhangshu~un@zzu．edu．cn【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofRNAinterferencetargetingEphre

6、ceptortyro·sinekinaseA7(EphA7)geneonthebiologicalbehaviorofSMMC一7721hepatomacellline．MethodsRccombinantplasmidofEphA7gene—targetingsmallinterferingRNA(siRNA)wastransfectedintolivercancerSMMC-7721cellsbyLipofectamine2000．TheexpressionofEphA7genemRNAandproteininSMMC-7721cellstransfec

7、tedwithpRNA—siEphA7wasdetectedbyreal—timequantitativepolymerasechainreaction(Real—timePCR)andWesternblotting．Methy1thiazoltetrazolium(Mrr)assaywasusedtode—tecttheproliferativeactivityofthetransfectedSMMC-7721cells．Thechangesofcellcycleaftertransfec—tionweredetectedbyflowcytometry．T

8、ranswellchamberinvasionass