体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建-论文.pdf

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1、第5卷第4期器官移植V01．5No．42014年7月OrganTransplantationJu1．2014实验研究·体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建赵辉孟炜易述红陈规划【摘要】目的探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法将L02肝细胞培养后分为损伤3h组、6h组和12h组，每组再根据加入不同浓度的过氧化氢(H0)分为100、200、300、500、750、1000Ixmol／L6个亚组，对照组不加入HO，分别在培养箱中继续孵育3h、6h或12h后进行细胞计数试剂盒(CCK)一8检测。另1组L02肝细胞培养后分为损伤3h组、6h组和12h组，损伤3h组再根据加入H，0，浓度不同分为1

2、00、200、300、500、750Ixmol／L5个亚组，损伤6h组分为1O0、200、300、500l,zmol／L4个亚组，损伤12h组分为100、200、300Ixmol／L3个亚组，对照组不加入HO，分别在培养箱中继续孵育3h、6h或12h后进行AnnexinV一异硫氰酸荧光素(FITC)／碘化丙啶(PI)双染流式细胞检测。损伤模型的建立及鉴定：L02肝细胞培养后损伤组加入200txmol／LHO，对照组不加入HO。在培养箱中继续孵育6h后检测细胞线粒体膜电位、丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(Asrr)等

3、指标。结果损伤3h组中，200、300、500、750、1000Ixmol／L等各亚组的细胞存活率与对照组比较，差异有统计学意义(均为P<0．O1)；损伤6h组中，各亚组细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0．01)；损伤12h组中，各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0．01)。3hH，O，浓度与细胞存活率的相关系数为一0．993，6h组为一0．955，12h组为一0．819。AnnexinV—FITC／PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H0损伤情况下细胞凋亡／坏死率：损伤3、6、12h组中，损伤各亚组与对照组比较，差异均有统计学意义(均为P<0．01)。

4、3h组H，0，浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0．97l，6h组为0．992，12h组为0．986。与对照组比较，200b~mol／IH，0，作用6h处理L02肝细胞损伤组的线粒体膜电位、MDA、ROS、SOD、ALT、AST差异均有统计学意义(均为P<0．01)。结论200pmlol／LH。0作用6h处理L02肝细胞是体外模拟缺血一再灌注或氧化损伤的良好模型。【关键词】肝细胞；氧化损伤；缺血一再灌注损伤；凋亡【中图分类号】R617【文献标志码】A【文章编号】1674-7445(2014)04—0010—06EstablishingamodelofoxidativedamageofL02

5、hepatocytesinvitroZhaoHut，MengWet，YiShuhong，ChenGuihua．DepartmentofHepatobiliarySurgery，theThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou510630，ChinaCorresTmndingauthor：YiShuhong，Email：yishuhong@163．coin【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemethodofestablishingamodelofoxidativedamageofL02hep

6、atocytes．MethodsL02hepatocyteswerecultureddividedinto3hdamagegroup，6hgroupand12hgroup．Eachgroupwasdividedinto6subgroupsaccordingtodifferentconcentrationsofhydrogenperoxide(H2O2)added：100，200，300，500，750，1000~zmol／L．ThecontrolgroupwastreatedwithoutH2O2．Allgroupsweretestedwithcellcountingkit(CCK)一8a

7、fterincubatingfor3h，6hor12hrespectively．TheotherL02hepatoeyteswereculturedanddividedinto3hdamagegroup，6hgroupand12hgroup．The3hgroupwasdivi(1edinto5subgroupsaccordingtodifferentconcentrationsofH2O2added：100，200，30