镉损伤肝细胞体外模型的建立-论文.pdf

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1、现代农业科技2013年第22期动物科学镉损伤肝细胞体外模型的建立杨建泉倪慧z王玲玲：韩涛：刘学忠z(江苏省南通市如东县畜牧兽医站，江苏南通226400；扬州大学兽医学院)摘要在建立大鼠原代肝细胞体外培养的基础上。研究了不同浓度的醋酸镉对肝细胞存活率的影响。在原代肝细胞体外培养的不同时间点(4、7、10、24h)，用不同浓度的醋酸镉(0、O．5、1．O、2．0、4．0~mol／L)处理3h，M1tr法测定细胞的相对存活率。结果显示。随着镉剂量的增加，细胞的相对存活率降低。当醋酸镉浓度为4．0p,mol／L，细胞的相对存活率为78．35％，与

2、对照组有极显著性差异(P<0．01)；用4．0p．mol／L醋酸镉在不同时间点处理肝细胞，与时照组相比，细胞存活率均极显著降低(尸

3、dryStationofNantongCityinJiangsuProvince，NantongJiangsu226400；CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity)AbsttactInthisstudy．theratprimaryhepatocyteculturesysteminvitrowasusedtostudythechangesofcellviabilityindifferentconcentrationsofcadmium．Inprimaryhepatocyteculture

4、datdiferenttimepointsinvitro(4h、7h、10hand24h)，whichwereincubatedwithcadmiumacetateofdiferentconcentrations(0p,mol／L，0．5~mol／L，1．0I~mol／L，2．0p,mol／L，4．0I~m01／L)for3h．TheresuhsofM13"assayshowedthatCdreducedthemotilityratofprimaryhepatocytesatdose—dependant．Afterexposedto4．0

5、~mol／Lcadmium．thecellmotilitydecreasedto78．35％，showingasignificantlydiferencefromthecontrolgroup(P

6、ywasataconcentration—dependentmanner．andthecellinitialstatecouldsignificantlyaffectCd—inducedcellviability．Keywordscadmium；hepatocyte；rat镉损伤分子机制的深入研究依赖于肝细胞体外培养的酶标仪sunrise—basic：Tecan，Australia；PH计：MettlerToledo，良好模型。对大鼠原代肝细胞进行体外培养的方法较多㈣，Switzerland；二氧化碳培养箱HF90：Thermo，USA；

7、电热恒温试验室多采用直接剪切法[51、组织块消化法[61和两步胶原酶鼓风干燥箱DHG一9140A，电热恒温水槽DK一600型，由上海灌流法口_嘲等方法。肝细胞进行体外培养时，存在增殖能力精宏实验设备有限公司生产；漩涡振荡仪ZW—A，由江苏金小、原代培养的细胞死亡率高等缺点，不利于干细胞体外模坛荣华仪器有限公司生产：超净工作台SW—CJ一1FD，由苏型的使用和推广[91。在实验室中。胶原酶灌流法也是一种效州净化设备有限公司生产1”1。果较好的千细胞分离法，但采用该方法，操作复杂，技术要1．2试验方法求高，不能广泛推广使用嗍。该文在原有的基础

8、上对胶原酶1．2．1大鼠肝细胞的分离。在试验过程中，以Seglent两步灌流法进行优化。目的是寻找一种可以在实验室推广的、操胶原酶灌注法为基础，对试验方法进行优化和改良，以使分作简单的、分离效