宫内发育迟缓致大鼠肝细胞胰岛素敏感性降低及体外胰岛素抵抗模型的建立-论文.pdf

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1、北京大学学报(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Vo1.46No.3Jun.2014·论著·宫内发育迟缓致大鼠肝细胞胰岛素敏感性降低及体外胰岛素抵抗模型的建立张金,邢燕,王新利,关育红,张慧(北京大学第三医院儿科,北京100191)[摘要]目的:探讨宫内发育迟缓(intrauterinegrowthretardation,IUGR)大鼠肝细胞胰岛素敏感性的变化情况,初步建立体外胰岛素抵抗模型。方法:采用孕期低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型,分别于仔鼠生后60d和90d,测定空腹血糖和空腹胰岛素,计算胰

2、岛素抵抗指数(homeostasismodelassessment—insulinresistance,HOMA—IR)和胰岛素敏感指数(insulinsensitivityindex,ISI)。采用两步胶原酶灌注法获取大鼠肝细胞,分为对照组肝细胞和IUGR组肝细胞,对照组肝细胞设定两个平行组,分别为正常对照组和胰岛素诱导组。采用不同浓度胰岛素体外作用于正常大鼠肝细胞,确定建立胰岛素诱导组的最佳作用浓度。采用CCK一8方法检测肝细胞活力,葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率来评价肝细胞胰岛素敏感性。比较对照组、IUGR组及胰岛素诱导组肝细胞活力及葡萄糖摄取

3、率。结果:IUGR鼠出生后60d和90dHOMA.IR均显著高于对照组(t=一17.02,P<0.05;£=一12.52,P<0.05),而ISI则显著低于对照组(t=5.61,P<0.05;t:12.42,P<0.05)。生后60d和90d,培养原代大鼠肝细胞48h时对照组、IUGR组和胰岛素诱导组间肝细胞活力差异无统计学意义(F:1.34,P=0.29;F=0.22,P=0.81)。生后60d和90d,IUGR组和胰岛素诱导组肝细胞葡萄糖摄取率均低于对照组,3组间差异有统计学意义(F=9.28,P=0.002;F=56.60,P<0.001),但IUG

4、R组和胰岛素诱导组问差异无统计学意义(P=0.08,P=0.10)。结论:IUGR大鼠青年期肝细胞的胰岛素敏感性已有所降低,并持续至成年期;高浓度胰岛素可诱发体外正常大鼠肝细胞产生胰岛素抵抗。[关键词]胎儿生长迟缓;胰岛素抗药性;肝细胞;体外研究;大鼠【中图分类号]11714.51[文献标志码]A[文章编号]1671—167X(2014)03-0464-05doi:10.3969/j.issn.1671—167X.2014.03.024Decreasedinsulinsensitivityinrathepatocyteswithintrauterinegr

5、owthretardationandestablishmentofinsulinresistancecellmodelinvitroZHANGJin,XINGYan,WANGXin·li,GUANYu—hong,ZHANGHui(DepartmentofPediatrics,PekingUniversityThirdHospital,Beijing100191,China)ABSTRACT0bjective:Toexplorethehepatocyteinsulinsensitivityofintrauterinegrowthretardation(IUG

6、R)ratsandestablishaninsulinresistancecellmodelinvitro.Methods:AnIUGRanimalmodelwasestablishedbyproteinmalnutritionduringthemotherpregnancy.On60dand90dafterbirth.theofspringratswerefastedfor12hoursandthentheirangularveinbloodwascollectedtomeasurethefastingplasmaglucoseandfastingser

7、uminsulinlevel,thentheinsulinresistanceindex(HOMA—IR)andinsulinsensitivityindexfISI)werecalculated.TheinsulinsensitivitywasevaluatedbyH0MA.IRandISI.Primaryhepatocytesfromeachgroupwererespectivelyisolatedbytwo.stepperfusionwithcollage—naseandweredefinedasnormalhepatocytesgroupandIU

8、GRhepatocytesgroup.Thenormalhepat

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