内毒素诱导大鼠建立脓毒症脑损伤模型-论文.pdf

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1、·l98·广东医学2014年1月第35卷第2期GuangdongMedicalJournalJan．2014，Vo1．35，No．2内毒素诱导大鼠建立脓毒症脑损伤模型术温妙云，郑侠，邓医宇。，曾红科。南方医科大学研究生学院(广州510515)；广东省医学实验动物中心(广东佛山528248)；广东省人民医院(广东省医学科学院)急危重症医学部(广州510080)【摘要】目的通过腹腔注射内毒素(LPS)建造脓毒症脑损伤动物模型，为脓毒症脑损伤的研究提供应用基础。方法将100只SD大鼠按体重随机分为空白对照组、

2、LPS10、20、30、40mg／kg组，每组20只，其中l0只用来观察造模后7d的死亡率，另10只观察造模前及造模后24h精神状态的变化，以及造模24h后取血和脑组织进行检测。结果大鼠腹腔注射LPS后精神萎靡不振、竖毛、拉稀，l0、20mg／kg组大鼠死亡率<50％，30mg／kg组大鼠死亡率为60％，40mg／kg组大鼠24h全部死亡。各组大鼠造模24h后白细胞均减少50％以上，与对照组比较，造模24h后各模型组大鼠体内TNF一仪和IL一6显著上升，脑组织出现一定程度损伤。结论以腹腔注射30mg／k

3、gLPS造大鼠脓毒症脑损伤模型较为理想。【关键词】内毒素；脓毒症；脑损伤；大鼠；炎症因子脓毒症(sepsis)是由感染引起的全身炎症反应综司)、尼氏染色液(货号C0117，碧云天，批号：201308)。合征(SIRS)，其本质是大量细胞因子和炎症介质释放1．2模型的制作动物购人饲养5d后，按体重将大鼠导致的宿主自身免疫性损伤。是临床危重疾病患随机分为5组，即空白对照组、LPS10、20、30、40mg／kg者死亡的主要原因之一，在美国每年因其死亡的人数组，每组20只，其中10只用来观察造模后7d的死亡达

4、17．5～20万。其中儿童死亡率为10％～15％，成人率，另l0只观察造模前及造模后24h精神状态的变死亡率高达40％。脓毒症脑病(sepsisassociateden—化，以及造模24h后取血和脑组织进行检测。实验前cephalop—athy，SAE)是脓毒症常见的并发症，是指缺禁食不禁水12h，取LPS适量加生理盐水溶解至所需乏中枢神经系统感染的临床或实验室证据，由全身炎浓度，大鼠按5mL／kg体重腹腔注射LPS造模，空白对性反应引起的弥散性脑功能障碍。脓毒症并发脑病照组腹腔注射等剂量的生理盐水。者

5、病死率显著高于无脑病者。其发病机制目前尚未1．3指标观察与测定明确，亦无特效治疗。脓毒症动物模型是研究脓毒症、1．3．1精神状态及死亡情况观察造模前观察记录脓毒症脑损伤发病机制和临床防治所必须的实验平精神状态、生活习性。按5mL／kg体重腹腔注射LPS台，2013年6一l1月本研究拟在内毒素(LPS)攻击大制备脓毒症模型，造模后观察记录精神状态、生活习鼠建立脓毒症模型的方法上，摸索出较为理想的LPS性。造模后24h，处死一批大鼠进行相关测定，另一批剂量，进一步建立脓毒症脑损伤模型，从而为SAE的继续饲养

6、，观察造模后7d的死亡率。防治提供新的方法和思路。1．3．2体温及白细胞测定造模前及造模后24h测1材料与方法定记录大鼠体温、眼眶静脉丛取血0．5mL用血常规分1．1材料与试剂SD大鼠100只，购自广东省医学析仪测定大鼠白细胞。实验动物中心，雄性，体重250～300g。实验动物使用1．3．3血清中TNF一、IL一6测定造模后24h眼许可证号：SYXK(粤)2008—0002。动物饲养条件：5眶静脉丛取血0．5mL，3000r／rain4℃离心10min取只／大箱，群养，饲养温度与湿度：20～26℃，40

7、％～血清置一70℃冰箱备用。实验结束后按ELISA试剂盒70％，采用l0h：14h昼夜间断照明；饲养室条件始终说明书测定大鼠血清中TNF一、IL一6的含量。保持稳定，以保证实验结果的可靠性。喂以全价颗粒1．3．4脑组织病理检测造模24h后取存活大鼠腹饲料(由广东省医学实验动物中心提供)。自由进食腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，将大鼠仰卧位固定于实饮水，由饮水瓶自由摄取。主要仪器与试剂：全自动血验台上，剪开胸部，暴露心脏，经左心室插入细导管，继球计数仪(日本光电，Mek一7222k型)、酶标仪(南京续向上推进直

8、至导管进入主动脉处，在右心耳处剪一华东电子集团医疗装备有限责任公司，DG5033A型)、小口放血，先以150mL生理盐水快速灌注，然后减慢轮转切片机(德国LEICA公司RM2135)，生物组织全灌注速度直至从右心耳处流出清亮的液体，再以溶于自动脱水机(湖北孝感医用仪器有限公司TS一12C)、0．1mol／L磷酸盐缓冲液(PBS)的4％多聚甲醛150mL病理图像分析系统(日本OLYMPUSBX41)。TNF—OL、继续灌注固定1h。然后打开大