MYCT1-TV真核表达载体的构建及鉴定-论文.pdf

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1、现代肿瘤医学2014年6月第22卷第6期MODERNONCOLOGY，Jnn．2014，VOL．22，NO．06·1269·MYCT1一TV真核表达载体的构建及鉴定符爽，孙开来，富伟能ConstructionandidentificationofMYCT1一TVeukaryoticexpressionvectorFuShuang，SunKailai，FuWeinengDepartmentofMedicalGenetics，ChinaMedicalUniversity，LiaoningShenyang110001，China；Dep

2、artmentofHematologyLaboratory，ShengfingHospitalofChinaMedicalUniversity，LiaoningShenyang110022，China．【Abstract】Objective：ToconstructMYCT1一TV(Myctarget1transcriptvariant1)eukaryoticexpressionvectoranddetectitsexpressioninBe17402cells．Methods：Theentireopenreadingframeof

3、MYCT1一TvcomplementaryDNA(cDNA)wasobtainedbyRT—PCRfromnormalhumanbloodandclonedintothepEGFP—C1plasmid．Thefi—delityoftheconstructswasthenconfirmedbysequencing．MYCT1一TV—GFPvectorwasdeterminedbyRT—PCRandfluorescencemicroscopeobservationaftertransientlytransfectedintoBe174

4、02cells．Results：SequencingresultsverifiedthattheentireopenreadingframeofMYCT1一TVwassuccessfullyclonedintothepEGFP—C1vector．AftertransfectedwithMYCT1一TV—GFPvector．themRNAlevelofMYCT1一TVwasupregulatedandrecombinedgreenfluorescentproteinwasexpressedinBe17402cells．Conclus

5、ion：AneukaryoticexpressionvectorofMYCT1一TVwassuccessfullyconstructedwhichwilllayafoundationforthefurtherexplorationonunderstandingthefunctionofMY—CT1一TVinhepatocellularcarcinoma．【Keywords】MYCT1一TV；MYCT1；hepatocellularcarcinoma；expressionvectorModemOncology2014，22(06)：

6、1269—1271【摘要】目的：构建MYCT1一TV(Myctarget1transcriptvariant1)真核表达载体，鉴定其在肝癌细胞系Be17402中的表达。方法：以正常人外周血cDNA为模板，RT—PCR方法扩增该基因的开放阅读框，定向克隆至pEGFP—C1载体后送测序鉴定。将构建好的MYCT1一TV—GFP表达载体瞬时转染Be17402细胞，RT—PCR结合荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况并鉴定载体构建是否成功。结果：测序结果证实成功将MYCT1～TV的开放阅读框克隆至pEGFP—C1表达载体，且转染细胞后，MYC

7、T1一TVmRNA的表达水平显著上调，荧光显微镜下可见细胞内重组绿色荧光蛋白的表达。结论：成功构建MYCT1一TV—GFP表达载体，为进一步研究MYCT1一TV在肝癌中的作用机制奠定了基础。【关键词】MYCT1一TV；MYCT1；肝细胞癌；表达载体【中图分类号】R735．7【文献标识码】ADOI：10．3969／j．issn．1672—4992．2014．06．11【文章编号】1672—4992一(2014)06—1269—03MYCT1一TV(Myctarget1transcriptvariant1，GenBank著低于正常细胞

8、，为潜在的肿瘤抑制基因。为进一步研究accessionNo．GU997693)是我课题组从正常人外周血中克隆其在肝细胞癌发生发展中的作用机制，我们构建了MYCT1得到的MYCT1新的转录本，在喉癌、胃癌、肝癌和宫颈癌等一TV真核表达载体并转染肝癌B