恩诺沙星联合脂多糖致复合式鸡肝损伤模型的建立-论文.pdf

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1、一212一江苏农业科学2013年第41卷第8期郭凡溪，钱林东，刘腾飞，等．恩诺沙星联合脂多糖致复合式鸡肝损伤模型的建立[J]．江苏农业科学，2013，41(8)：212—214恩诺沙星联合脂多糖致复合式鸡肝损伤模型的建立郭凡溪，钱林东，刘腾飞，耿智霞，蒋凡，余祖功(1．南京农业大学动物医学院，江苏南京210095；2．云南农业职业技术学院，云南昆明650212)摘要：旨在建立恩诺沙星联合脂多糖诱发鸡肝的损伤模型，从而为家禽用护肝药物提供研究基础。先分别给予海蓝蛋鸡不同浓度的恩诺沙星(E至E组，浓度分别设为50、80、100、200、3

2、00、400、500mr／kg，1次／d，连续灌服3d)、脂多糖粗提液(LPS，L至I岬组，浓度设为1⋯246、8、10、15mL／kg，腹腔注射1次)处理，初步筛选出二者各自致肝损伤的剂量；在此基础上确定使用100mS／kg恩诺沙星(1次／d，连续灌服3d)联合腹腔注射2、4、6mL／kg脂多糖(腹腔注射1次)进行处理，以48h鸡存活率血清生化指标及肝组织病理学变化为筛选依据。结果表明：E至E和至组鸡出现死亡，E和至L4组鸡全部成活，但谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性水平上升明显，肝细胞病变明显，E。、E和L组变化不明显；100mr／kg

3、恩诺沙星联合4mL／kg脂多糖组细胞病变明显，使得谷丙转氨酶、谷草转氨酶、球蛋白升高，总蛋白、白蛋白、白球比显著降低，因此可作为新型复合式肝损伤模型用于家禽肝损伤机制和护肝药物作用机理的研究。关键词：肝损伤；恩诺沙星；脂多糖；鸡；动物模型中图分类号：$859．7文献标志码：A文章编号：1002—1302(2013)08—0212—03合适的肝损伤动物模型是研究肝损伤病理、评价护肝药1．1．2试验动物1日龄海蓝蛋鸡200羽，雌雄各半，购自物作用及机制的基础。目前已有多种肝损伤动物模型，单独南京汤泉鸡场。饲喂不含任何药物的饲料，至5月龄时

4、体重诱导常用的有脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)、CC1、对乙酰(1±0．2)kg时备用。氨基酚、刀豆蛋白A、乙醇等；复合式诱导常用的有脂多1．2试验方法糖联合卡介苗或D一半乳糖胺、乙醇、CC1联合刀豆蛋白1．2．1脂多糖粗提液的制备参照霍晓青等的方法，等。，但是未有关于脂多糖联合抗菌药物诱导肝损伤模型脂多糖粗提液的制备过程为：(1)将鸡致病性大肠杆菌复苏的报道。已有报道表明，氟喹诺酮类药物和内毒素皆具有肝后接种于营养肉汤中，于37℃扩大培养24h后收集细菌悬毒性u，均可致肝损伤，且氟喹诺酮类药物在杀灭革兰氏液；

5、(2)3000r／min离心20min，沉淀用pH值7．4、0．01mol／L阴性菌时会诱发内毒素增加释放。由于在集约化家禽养的PBS洗涤3次，稀释为细菌数为2．0×10个／mL的浓菌殖实践中，细菌感染较为多见，而抗菌药物的大量使用甚至滥液；(3)浓菌液用超声波细胞粉碎仪(1O，75％)粉碎40min用现象普遍，因此临床家禽的肝损伤较为常见，其诱发原因也后于5000r／min离心10min；(4)上清液用微孔滤膜较为复杂。本研究模拟了家禽的养殖实践，尝试用恩诺沙星(0．22m)过滤滤液煮沸10min即得脂多糖粗提液，取适联合脂多糖来诱

6、发鸡肝损伤，以期为研究家禽肝损伤病理演量溶液于显微镜下观察无完整菌体即可，4oC保存备用。变、丰富肝损伤的动物模型、研究家禽护肝药物的作用机制奠1．2．2恩诺沙星、脂多糖诱导肝损伤剂量的筛选取健康鸡定模型基础。150羽，雌雄各半，平均分成15组，每组l0羽。按照不同的剂量将恩诺沙星损伤试验分为7组(E至E)，对应的灌胃1材料与方法剂量分别为50、80、100、200、300、400、500mg／kg，1次／d，连1．1试验材料续3d。按照不同的剂量将脂多糖损伤试验分为7组(Ll至1．1．1试剂与仪器恩诺沙星(I>99．0％，浙江国邦药

7、业有L7)，对应的脂多糖粗提液量分别为1、2,4⋯6810、15mL／kg，限公司)；鸡致病性大肠杆菌(临床分离株，由江苏省农业科腹腔注射1次。对照组用生理盐水代替药物作相同处理。观学院李银研究员惠赠)；超声波细胞粉碎机(XO一650D，南京察给药后鸡的精神状态、死亡情况，并于最后一次给药后48h先欧仪器制造有限公司)；低速大容量多管离心机(LD—I1采血检测鸡血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活B，无锡市瑞江分析仪器有限公司)，分光光度计(Smart．性水平的变化，剖检，苏木精一伊红(HE)染色观察肝组织的Spec30

8、00，BIO—RAD)。病理变化。1．2．3确定恩诺沙星联合脂多糖诱导肝损伤模型的建立方法取健康鸡40羽，雌雄各半，平均分成4组，每组10羽，其收稿日期：2013—01—04基金项目：国家自然科学基金(编号：311722