圈养大熊猫戊型肝炎病毒感染调查-论文.pdf

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1、野生动物ChineseJournalofWildlife2013，34(6)：323—326圈养大熊猫戊型肝炎病毒感染调查张成林丁叶闫鹤普天春佘锐萍尹君杨明海张金国(1．北京动物园，北京，100044；2．中国农业大学动物医学院，北京，100193)摘要：采用ELISA、巢式RT—PCR、免疫组织化学等多种方法对北京动物园保存的大熊猫组织材料和部分现存活个体的粪便、血清等样品进行戊型肝炎病毒抗原调查。调查发现在死亡大熊猫肝脏组织中戊肝病毒抗原阳性检出率为88．9％(8／9)，肾脏的阳性检出率为85．7％(6／7)。现活体动物的粪便

2、、血清抗原检查没有出现阳性结果。结果说明死亡大熊猫曾感染过戊型肝炎病毒，现有个体中没有戊肝病毒感染。关键词：大熊猫；戊型肝炎病毒(HEV)；免疫组化；巢式RT—PCR；ELISA中图分类号：$85文献标识码：A文章编号：1000—0127(2013)06—323—04SurveyofHepatitisEVirusInfectioninGiantPandaZhangChenglinDingYeYanHePuTianchunSheRuipingYinJun。YangMinghaiZhangJinguo(1．BeringZoo，Beij

3、ing，100044，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgricultureUnive~ity，咖，100193，China)Abstract：WetestedforhepatitisEvirusingiantpandasheldatBeijingZoo．Sampleswerefromliversandkidneysofdeadpandas，andbloodserumandfecesoflivepandas．OurmethodswereRT—PCR，ELISA，andimmunit

4、yhistoehemistry．Liversampleswere88．9％positive【8／9)．Kidneysampleswere85．7％positive【6／7)．Allbloodserumandfecessampleswerenegative．DeadgiantpandashadcontractedhepatitisEviruswhilelivegiantpandaswerenotinfected．Keywords：GiantpandaHepatitisEvirus；Immunityhistochemistry；RT—

5、PCRELISA大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)作为中国特产濒危珍1材料与方法稀动物，因疾病死亡是圈养大熊猫数量减少的因素之1．1材料⋯一1．1．1组织来源。营养不良、腹水症是大熊猫常见疾病，并且发病肝脏样品9例、肾脏样品7例，均为北京动物园病的原因有很多种。戊型肝炎病毒是一种可通过肠道感死大熊猫的保存材料；粪便样品5份，采自北京动物园染的肝炎病毒亚型，人畜共患，常以流行性或散发性方大熊猫的新鲜粪便i血清样品l5份，北京动物园日常体式在人群中传播，在牛、羊、猪、狗、鸡、鸭、鸽检工作所采大熊猫的血清保存样品。等，

6、大猩猩、猴、鹿也有感染报道。在圈养大熊猫1．1．2试剂中的感染情况，至今未有研究报道。采用PCR、ELISA、兔抗人HEV多克隆抗体(～抗)、二抗及其他免疫免疫组织化学方法对大熊猫感染戊型肝炎病毒的情况进组化试剂均购自北京博奥森生物有限公司；Trinzol购自行调查，并使用免疫组织化学的方法对病死大熊猫肝脏北京普博欣公司：TaqDNA聚合酶、dNTP购自北京博大和肾脏组织中的HEV抗原分布情况进行检测，以了解大泰克公司；引物订自北京奥科生物公司；ELISA试剂盒熊猫肝炎病毒的感染情况以及其器官病理学特点，为更均购自北京万泰生物药业

7、股份有限公司。好地保护大熊猫种群提供有效的理论依据。同时，也为1．2方法深入研究肝炎病毒在动物中的分布及其与人类肝炎的关1．2．1材料的采取系提供参考。肝脏、肾脏：对发病死亡的大熊猫病例进行剖检，基金项目：北京市公园管理中心项目——圈养野生动物戊型肝炎病毒流行病学调查第一作者简介：张成林，男，49岁，高级兽医师主要从事野生动物疫病防治和研究工作。E—mail：zhch6465@263．net324张成林等：圈养大熊猫戊型肝炎病毒感染调查6期取肝脏和肾脏组织，置于2．5％多聚甲醛一戊二醛混合加样：每孔加待测样品或阴阳对照100Ixl

8、(空白对照除固定液中固定。外)；(4)温育：用封板膜封板后置37℃温育60rain：粪便：取大熊猫的新鲜粪便于一20~C冷藏。(5)洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后血清：取大熊猫的血液，分离提取血清液于一20℃一次尽量扣干；(6)加酶：