DKK1基因干扰对原发性肝细胞癌细胞增殖的影响及其机制探讨-论文.pdf

《DKK1基因干扰对原发性肝细胞癌细胞增殖的影响及其机制探讨-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、山东医药2014年第54卷第28期larpathophysiologyofatrialfibrillation[J]．JClinInvest，2011，[J]．JMolCellCardiol，2009，47(5)：656-663．12l(8)：2955-2968．[16]OzgenN，DunW，SosunovEA，eta1．Earlyelectricalremodeling[14]NattelS．Calcium—activatedpotassiumcurrent：anove1．ionchannelinrabb

2、itpulmonaryveinresultsfromtraffickingofintracellularcandidateinatrialfibrillation[J]．JPhysiol，2009，587(Pt7)：SK2channelstomembranesites[J]．CardiovascRes，2007，751385．1386．。(4)：758-769．[15]NagyN，SzutsV，HorvathZ，eta1．Doessmall-conductancecalci-(收稿日期：2014-03—15)

3、um—activatedpotassiumchannelcontributetocardiacrepolarizationDKK1基因干扰对原发性肝细胞癌细胞增殖的影响及其机制探讨边立忠，高松(1淄博市齐都医院，山东淄博255400；2青岛市即墨疾病控制中心)摘要：目的观察腺病毒介导的特异性抑制DKK1(shDKK1)基因对原发性肝细胞癌(HCC)细胞增殖的影响，并探讨其机制。方法设计合成3对DKK1基因的shRNA，筛选出最佳干扰片段，构建腺病毒载体Ad5．shDKK1。取对数生长期的人HCC细胞株SMMC

4、-7721，分别转染Ad5．shDKK1(转染组)和Ad5．shCON(空载组)。采用MTT法检测细胞转染后24、48、72、96h的相对增殖活力，采用Westernblot法检测细胞Wnt信号通路中的p一链蛋白(p—catenin)、C．Myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)。结果转染组转染后24、48、72、96h的细胞相对增殖活力分别为133．65％±11．30％、169．41％±4．64％、251．39％±13．86％、336．70％±16．62％，空载组分别为94．

5、65％±1．77％、98．01％±3．28％、93．80％4-2．26％、93．41％±2．22％；两组同时间点比较，P均<0．O1。转染组13一catenin、C—Myc、CyclinD1、PCNA分别为568．59％-4-25．36％、351．26％±13．43％、295．35％±45．56％、125．35％±23．61％，空载组分另0为102．23％±4．53％、98．65％±7．89％、101．35％±9．23％、97．65％±6．87％，P均<0．05。结论腺病毒介导的shDKK1基因能促进HCC细

6、胞增殖，可能与激活Wnt信号通路有关。关键词：肝肿瘤；DKK1；shRNA；腺病毒doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2014．28．011中图分类号：R735．7文献标志码：A文章编号：1002-266X(2014)28-0031-03我国是原发性肝细胞癌(HCC)高发国家，全世Abcam公司；辣根过氧化物酶偶联山羊抗兔IgG．界50％以上的新发和死亡HCC发生在中国。HRP、山羊抗鼠IgG．HRP抗体购自SantaCruz；ECL超过60％的HCC患者在初次就诊时已经进入中晚化学发光

7、显色试剂盒购买自Millipore公司；各种限期，其5年总生存率只有7％左右j。原癌基因的制性内切酶、DL5000Marker、T4DNA连接酶、RT-过表达和抑癌基因的表达下调或功能缺失都会导致PCR试剂盒购自大连宝生物公司；其他试剂均为进HCC。DKK1在肿瘤进程中的作用已引起广泛关口或国产分析纯。1．2方法注，但在肿瘤中的表达水平有很大差异，其作用机制1．2．1DKK1基因shRNA载体构建根据Gene—尚未清楚。2011年3月一2013年8月，我们观察了Bank的DKK1mRNA序列NM一012242

8、，设计合成3腺病毒介导的特异性抑制DKK1(shDKK1)基因对对shRNA及1对对照引物。上游引物DKK1—1F：5一HCC细胞增殖的影响。现报告如下。GATCCCGGTrCTCAATYCCAACGCTATCAAGAGI1AG1材料与方法CGrITGGAATYGAGAACCG1T唧A．3，下游引物D1．1材料人胚胎肾细胞株HEK293购自美国KK1—1R：5一AGCTFAAAAAACGGTTCTC