pIRES-IL-24-TRAIL基因载体的构建及其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响-论文.pdf

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1、第24卷第19期中国现代医学杂志Vo1．24No．192014年7月ChinaJournalofModernMedicineJu1．2014文章编号：1005—8982(2014)19—0021-05·论著·plRES⋯IL24TRAIL基因载体的构建及其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响；l：魏杨辉，黄耀，刘娟，张卫星，吴爱国2(1．深圳市第四人民医院普外科，广东深圳518033；2．南方医科大学珠江医院普外科，广东广州510515)摘要：目的构建真核表达载体pIRES—IL一24一TRAIL，探讨其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响。方法以人胎盘组织总R

2、NA为模板，采用RT—PCR二步法，扩增TRAIL的cDNA序列，将其克隆入plRES载体，扩增IL一24的cDNA序列，将其克隆入pIRES—TRAIL载体，构建其真核瞬时表达载体pIRES—IL一24一TRAIL，以Lipofectamine2000转染技术，将TRAIL、IL一24基因导入肝癌细胞Bel-7402和PLC，流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，划痕实验比较不同组间细胞迁移情况。结果①克隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列，成功构建其真核表达载体；②流式细胞仪发现，实验组比对照组凋亡率高(P<0．O5)；③细胞划痕实验显

3、示实验组细胞迁移能力明显低于对照组(P<0．O5)。结论pIRES—IL一24一TRAIL构建成功，并能诱导肝癌细胞凋亡、降低其迁移能力。关键词：白介素一24；肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体；肝癌；迁移；凋亡中图分类号：R735．7文献标识码：AConstructionofplRES-IL-24-TRAILvectoranditsinfluencesonthemotilityandapoptosisofhepatocarcinomacellsWEIYang—hui，HUANGYao，LIUJuan，ZHANGWei—xing，WUAi-g

4、uo(1．DepartmentofGeneralSurgery,ShenzhentheFourthPeopleHospital，Shenzhen，Guangdong51803．P．R．China；2．DepartmentofGeneralSurgery,theAffiliatedZhujiangHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou,Cuangdong510515，P．R．China)Abstract：【Objective】Toconstructtheeukaryotieexpression

5、vectorplRES-IL-24一TRAILandinvestigateitsin-fluencesonthemotilityandapoptosisofhepatocarcinoma．【Methods】cDNAfragmentencodinghumanTRAILgenewasamplifiedbyreversetranscriptase—polymerasechainreaction(RT—PCR)withthetotalmRNAisolatedfromhu—manplacentatissueastemplate．ThePCRamplif

6、iedfragmentofTRAILgenewasclonedintopIRESvector．Andthen，eDNAfragmentencodinghumanIL一24genewasamplified．ThePCRamplifiedfragmentofIL-24genewassubelonedintotherecombinanteukaryoticexpressionvectorpIRES-TRAILtoconstructplRES——IL-24——TRAILplas——midaftersequencing．Subsequently．pla

7、smidDNAofpIRES—IL一24一TRAILwastransfectedintohepatocarcinomacellBel一7402andPLCwiththehelpofLipofectamine2000transfectionreagent．Cellapoptosiswasmeasuredwithflowcytometer．Woundhealingtestwasperformedforcellmotilityassay．【Results】①cDNAsequenceencodinghuman‘FRAILandIL一24genewas

8、successfullycloned．andrecombinanteukaryotieexpressionvectorplRES—IL一24一TRAILwascon