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《pIRES-IL-24-TRAIL基因载体的构建及其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第24卷第19期中国现代医学杂志Vo1.24No.192014年7月ChinaJournalofModernMedicineJu1.2014文章编号:1005—8982(2014)19—0021-05·论著·plRES⋯IL24TRAIL基因载体的构建及其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响;l:魏杨辉,黄耀,刘娟,张卫星,吴爱国2(1.深圳市第四人民医院普外科,广东深圳518033;2.南方医科大学珠江医院普外科,广东广州510515)摘要:目的构建真核表达载体pIRES—IL一24一TRAIL,探讨其对肝癌细胞迁移和凋亡的影响。方法以人胎盘组织总R
2、NA为模板,采用RT—PCR二步法,扩增TRAIL的cDNA序列,将其克隆入plRES载体,扩增IL一24的cDNA序列,将其克隆入pIRES—TRAIL载体,构建其真核瞬时表达载体pIRES—IL一24一TRAIL,以Lipofectamine2000转染技术,将TRAIL、IL一24基因导入肝癌细胞Bel-7402和PLC,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验比较不同组间细胞迁移情况。结果①克隆到TRAIL、IL-24基因的cDNA序列,成功构建其真核表达载体;②流式细胞仪发现,实验组比对照组凋亡率高(P<0.O5);③细胞划痕实验显
3、示实验组细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.O5)。结论pIRES—IL一24一TRAIL构建成功,并能诱导肝癌细胞凋亡、降低其迁移能力。关键词:白介素一24;肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体;肝癌;迁移;凋亡中图分类号:R735.7文献标识码:AConstructionofplRES-IL-24-TRAILvectoranditsinfluencesonthemotilityandapoptosisofhepatocarcinomacellsWEIYang—hui,HUANGYao,LIUJuan,ZHANGWei—xing,WUAi-g
4、uo(1.DepartmentofGeneralSurgery,ShenzhentheFourthPeopleHospital,Shenzhen,Guangdong51803.P.R.China;2.DepartmentofGeneralSurgery,theAffiliatedZhujiangHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou,Cuangdong510515,P.R.China)Abstract:【Objective】Toconstructtheeukaryotieexpression
5、vectorplRES-IL-24一TRAILandinvestigateitsin-fluencesonthemotilityandapoptosisofhepatocarcinoma.【Methods】cDNAfragmentencodinghumanTRAILgenewasamplifiedbyreversetranscriptase—polymerasechainreaction(RT—PCR)withthetotalmRNAisolatedfromhu—manplacentatissueastemplate.ThePCRamplif
6、iedfragmentofTRAILgenewasclonedintopIRESvector.Andthen,eDNAfragmentencodinghumanIL一24genewasamplified.ThePCRamplifiedfragmentofIL-24genewassubelonedintotherecombinanteukaryoticexpressionvectorpIRES-TRAILtoconstructplRES——IL-24——TRAILplas——midaftersequencing.Subsequently.pla
7、smidDNAofpIRES—IL一24一TRAILwastransfectedintohepatocarcinomacellBel一7402andPLCwiththehelpofLipofectamine2000transfectionreagent.Cellapoptosiswasmeasuredwithflowcytometer.Woundhealingtestwasperformedforcellmotilityassay.【Results】①cDNAsequenceencodinghuman‘FRAILandIL一24genewas
8、successfullycloned.andrecombinanteukaryotieexpressionvectorplRES—IL一24一TRAILwascon
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