RNAi沉默STAT3基因联合mTOR抑制剂rapamycin诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡-论文.pdf

《RNAi沉默STAT3基因联合mTOR抑制剂rapamycin诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、第39卷第5期吉林大学学报(医学版)Vo1．39NO．52013年9月JournalofJilinUniversity(MedicineEdition)Sep．2013903[文章编号]1671—587X(2013)05—0903—06DOI：10·7694／jldxyxb20130510RNAi沉默STAT3基因联合mTOR抑制剂rapamycin诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡张毅，张君薇，谢淑丽。，王广义(1．辽宁医学院附属第一医院微创肝胆外科，辽宁锦州121000；2．辽宁医学院附属第-N院肿瘤科，辽宁

2、锦州121000；3．吉林大学第一医院普通外科实验室，吉林长春130021；4．吉林大学第一医院肝胆胰外科，吉林长春130021)[摘要]目的：探讨PI3K／AKT／mTOR和JAK／STAT32条信号转导途径共同作用对肝癌细胞凋亡的影响，为肝癌基因治疗提供依据。方法：选取对数生长期BEL-7402细胞，随机分为对照组、mTOR抑制剂rapamycin(Rapa)组、阴性质粒组、阴性质粒+Rapa组、STAT3一siRNA质粒组和STAT3一siRNA质粒+Rapa组，应用Iipofectamine2000转染

3、试剂将含有目的基因的质粒转染BEL一7402细胞，同时应用rapamycin，分别采用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡率和形态学的变化，jc一1荧光染色观察线粒体膜电位(A~Fm)变化，Westernblotting法检测活性caspase一3蛋白表达水平。结果：STAT3一siRNA+Rapa组细胞凋亡率为6o．22±0．87，明显高于其他各组(P<0．05)，且细胞△m明显降低(27．28_-4-1．82，P<0．05)；Hoechst33258荧光染色检测，见STAT3一siRNA

4、有大量细胞出现细胞核聚集、边缘化和核碎裂等典型细胞凋亡形态；Westernblotting检测，STAT3一siRNA+Rapa组活性caspase一3蛋白表达水平明显高于其他各组(P<0．05)。结论：RNAi沉默BEL-7402肝癌细胞STAT3基因联合rapamycin可促进BEL一7402肝癌细胞的凋亡，二者具有明显的协同作用。[关键词]mTOR蛋白；STAT3基因；RNA干扰；rapamycin；细胞凋亡；肝细胞癌[中图分类号]R735．7[文献标志码]AApoptosisofhepatocarcin

5、omacellsBEL·-7402inducedwithSTAT3genesilencingcombinedwithrapamycinZHANGYi“，ZHANGJun-wei，XIEShu—li。，WANGGuang—yi(1．DepartmentofHepatobiliaryandPancreasSurgery，FirstHospital，LiaoningMedicalUniversity，Jinzhou121000，China；2．DepartmentofOncology，ThirdHospital，Li

6、aoningMedicalUniversity，Jinzhou121000，China；3．LaboratoryofGenera1Surgery，FirstHospita1，JilinUniversity，Changchun130021，China；4．DepartmentofHepatobiliaryandPancreaticSurgery，FirstHospital，JilinUniversity，Changchun130021，China)Abstract：ObjectiveToexploretheinf

7、luenceofPI3K／AKT／mTORandJAK／STAT3signalingpathwayinapoptosisofthehepatocarciomacells(HCC)，andtoprovidebasisforgenetherapyforlivercancer．MethodsBEL一7402cellsatinlogarithmgrowthphasewereselectedandrandomlydividedintocontrolgroup，scramble-siRNAgroup，STAT3一siRNA

8、group，scramble-siRNA+rapamycin(Rapa)group，RapagroupandSTAT3一siRNA+Rapagroup．TheplasmidspGCsi．U6／neoRFP—STAT3designedforexpressionofSTAT3siRNAwastransfectedintoBEL一7402cellsbyLipofectamine2000．Th