rhBMP-2对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究-论文.pdf

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1、第35卷第3期暨南大学学报(自然科学与医学版)Vol_35NO．32014年6月JournalofJinanUniversity(NaturalScience&MedicineEdition)Jun．20l4rhBMP．2对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究高寒，张荣华，朱晓峰，王攀攀，杨丽(暨南大学1．药学院中药学教研室，广东广州510632；2．附属第一医院中医科，广东广州510630)[摘要]目的：通过观察重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP一2)对骨髓问充质干细胞(MSCs)增殖、骨向分化能力的影响，以及对

2、内源性因子TGF—B。、Smad4和下游细胞因子cbfal的作用，阐释其对MSCs骨向分化影响可能的作用机制．方法：运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs；运用Mqq"法检测质量浓度分别为0、5、10、20、40、80、100ng／mLrhBMP-2对sD大鼠MSCs增殖活性的影响；以碱性磷酸酶(ALP)活性及ALP染色阳性率确定rhBMP一2的最佳促MSCs骨向分化浓度，并以该浓度对MSCs骨向分化进行干预．按是否添加经典成骨诱导液将实验分为：空白组，经典组，rhBMP-2组，rhBMP-2+经典组．通过检测ALP、

3、I型胶原(ColI)、骨钙素(BGP)和钙化结节的表达，以评价各组骨向分化能力；通过检测TGF—p，、Smad4、CbfctlmRNA的表达，以评价各组促MSCs骨向分化的作用机制．结果：rhBMP一2的最佳促MSCs增殖质量浓度为80ng／mL，最佳促MSCs骨向分化质量浓度为40rig／mL．经典组和rhBMP一2诱导各组均能促进MSCs骨向分化，刺激TGF—p分泌，并上调Smad4、CbfcdmRNA的基因表达，而TGF—p。在早期分泌量最高，提示其可能在MSCs早期骨向分化过程起重要作用．结论：rhBMP-2诱

4、导各组均有促MSCs骨向分化的作用，可能是通过促进TGF—p的分泌，启动TGF—B超家族／Smads信号通路调控MSCs的骨向分化．[关键词]骨髓间充质干细胞；成骨分化；rhBMP-2；TGF—p。；Smad4；Cbfal[中图分类号]R966[文献标志码]A[文章编号]1000—9965(2014)03—0266—07StudyoneffectsandmechanismofosteoblastinducedwithrhBMP．2ontheMSCs0fSDratsGAOHan，ZHANGRonghua，ZHUXiaof

5、eng，WANGPanpan，YANGLi(1．DepartmentofChineseMateriaMedica，CollegeofPharmacy，JinanUniversity，Guangzhou510632，China；2．DepartmentofTraditionalChineseMedicine，theFirstAfiliatedHospital，JinanUniversity，Guangzhou510630，China)[Abstract]Aim：Thisresearchwastoinvestigateth

6、eeffectsofrhBMP-2ontheabilityofproliferationandosteogenicdifferentiation，aswellastheeffectofitsendogenousTGF-Bl，Smad4andthedownstreamcytokinesCbfaltofurtherexplainitsmechanismondifferentiationofMSCsintoosteoblast．Methods：MSCswereisolatedandpurifiedbydifferential

7、timeadherentmethod．MTTmethodwasusedtoconfirmthemosteffectiveconcentrationofrhBMP一2ontheproliferationofMSCs，themosteffectiveconcentrationofwhichonthedifferentiationofMSCsintoosteoblastwasjurgedbytheactivityandpositivestainingofalkalinephosphatase(ALP)．Accordingto

8、thedifferentinducedcondition，MSCsweredividedinto4groups：controlgroup，classicgroup，rhBMP一2groupandrhBMP一2+classicgroup．ALP，typeIcollagen(ColI)，boneglaprotein(BGP)andca