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《rhBMP-2对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第35卷第3期暨南大学学报(自然科学与医学版)Vol_35NO.32014年6月JournalofJinanUniversity(NaturalScience&MedicineEdition)Jun.20l4rhBMP.2对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究高寒,张荣华,朱晓峰,王攀攀,杨丽(暨南大学1.药学院中药学教研室,广东广州510632;2.附属第一医院中医科,广东广州510630)[摘要]目的:通过观察重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP一2)对骨髓问充质干细胞(MSCs)增殖、骨向分化能力的影响,以及对
2、内源性因子TGF—B。、Smad4和下游细胞因子cbfal的作用,阐释其对MSCs骨向分化影响可能的作用机制.方法:运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs;运用Mqq"法检测质量浓度分别为0、5、10、20、40、80、100ng/mLrhBMP-2对sD大鼠MSCs增殖活性的影响;以碱性磷酸酶(ALP)活性及ALP染色阳性率确定rhBMP一2的最佳促MSCs骨向分化浓度,并以该浓度对MSCs骨向分化进行干预.按是否添加经典成骨诱导液将实验分为:空白组,经典组,rhBMP-2组,rhBMP-2+经典组.通过检测ALP、
3、I型胶原(ColI)、骨钙素(BGP)和钙化结节的表达,以评价各组骨向分化能力;通过检测TGF—p,、Smad4、CbfctlmRNA的表达,以评价各组促MSCs骨向分化的作用机制.结果:rhBMP一2的最佳促MSCs增殖质量浓度为80ng/mL,最佳促MSCs骨向分化质量浓度为40rig/mL.经典组和rhBMP一2诱导各组均能促进MSCs骨向分化,刺激TGF—p分泌,并上调Smad4、CbfcdmRNA的基因表达,而TGF—p。在早期分泌量最高,提示其可能在MSCs早期骨向分化过程起重要作用.结论:rhBMP-2诱
4、导各组均有促MSCs骨向分化的作用,可能是通过促进TGF—p的分泌,启动TGF—B超家族/Smads信号通路调控MSCs的骨向分化.[关键词]骨髓间充质干细胞;成骨分化;rhBMP-2;TGF—p。;Smad4;Cbfal[中图分类号]R966[文献标志码]A[文章编号]1000—9965(2014)03—0266—07StudyoneffectsandmechanismofosteoblastinducedwithrhBMP.2ontheMSCs0fSDratsGAOHan,ZHANGRonghua,ZHUXiaof
5、eng,WANGPanpan,YANGLi(1.DepartmentofChineseMateriaMedica,CollegeofPharmacy,JinanUniversity,Guangzhou510632,China;2.DepartmentofTraditionalChineseMedicine,theFirstAfiliatedHospital,JinanUniversity,Guangzhou510630,China)[Abstract]Aim:Thisresearchwastoinvestigateth
6、eeffectsofrhBMP-2ontheabilityofproliferationandosteogenicdifferentiation,aswellastheeffectofitsendogenousTGF-Bl,Smad4andthedownstreamcytokinesCbfaltofurtherexplainitsmechanismondifferentiationofMSCsintoosteoblast.Methods:MSCswereisolatedandpurifiedbydifferential
7、timeadherentmethod.MTTmethodwasusedtoconfirmthemosteffectiveconcentrationofrhBMP一2ontheproliferationofMSCs,themosteffectiveconcentrationofwhichonthedifferentiationofMSCsintoosteoblastwasjurgedbytheactivityandpositivestainingofalkalinephosphatase(ALP).Accordingto
8、thedifferentinducedcondition,MSCsweredividedinto4groups:controlgroup,classicgroup,rhBMP一2groupandrhBMP一2+classicgroup.ALP,typeIcollagen(ColI),boneglaprotein(BGP)andca
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