mscs与去分化mscs在成骨分化过程中免疫原性上调的研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目MSCs与去分化MSCs在成骨分化过程中免疫原性上调的研究研究生姓名付雪杰指导教师姓名施勤专业名称免疫学研究方向干细胞免疫调节论文提交日期2015年4月苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子

2、文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：对舍杏B期：屮丨1f导师签名：日期：-yol^^,屮苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：质提交的学位论文是本人在导筛的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡

3、献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：七t雪杰曰期：下^I^致谢MSCs与去分化MSCs在成骨分化过程中免疫原性上调的研究致谢岁月如梭，三年的研究生生涯即将结束，值此论文完成之际，向曾经指导、关心和帮助过我的老师、同学和朋友们表示最真挚的感谢！首先衷心的感谢我的导师施勤教授，您渊博的专业知识、严谨求实的工作作风、开拓创新的科研精神和平易近人的生活态度是我永远学习的楷模！三年来，施老师不仅在科研方面对我悉心指导，而且在生活和思想上给予了无微不至的关怀。正是由于施老师孜孜不倦的教诲，开启

4、了我对科研的兴趣，而老师系统严格的实验指导，使我熟练的掌握了许多科研技术，并顺利的完成了实验课题，这都将是我宝贵的生活财富，为今后的工作奠定了坚实的基础！特别感谢免疫所的古彦铮老师在研究中给予的帮助和在生活上的关心！感谢骨科研究所的顾巧丽老师、赵环老师、周熙超老师、许其秀老师、蔡燕老师、张文老师、魏东磊老师、刘慧玲老师，还有韩兴龙师兄、刘欣欣师兄、陆沈栋师兄、王贵超师兄、余珊珊师姐、张莹师姐、张慧师姐在研究中给予的帮助和在生活上的关心！感谢谢芳教授、王强斌教授、罗宗平教授在学习和研究中所给予的指导和帮助！感谢三年的同窗刘可、黄

5、振、何大伟、孙佳佳、郭兵兵、尤欣然、张标、王俊、倪鹏平、周春艳、王芸芸、宋莉、文雯、安竞男、董盼盼、张弛、汲小沛等，以及鞠晓晶师妹、刘星志师弟、周龙师弟、徐昌禄师弟、张强师弟等，能和大家在一起共同努力进步是我最珍贵的回忆！深深感谢一直默默支持我的父亲、母亲和其他的家人，有了你们无私的关怀和鼓励才使得我顺利的完成了学业！感谢母校苏州大学三年来对我的大力栽培！54指导小组成员：古彦铮博士顾巧丽博士MSCs与去分化MSCs在成骨分化过程中免疫原性上调的研究中文摘要中文摘要目的：比较间充质干细胞（mesenchymalstemcell

6、s,MSCs）与去分化间充质干细胞（De-differentiatedmesenchymalstemcells,De-MSCs）的成骨分化潜能，并探究MSCs与De-MSCs在成骨分化过程中免疫原性的改变及其分子机制。方法：用酶消化法从人胎盘中分离得到MSCs，经鉴定后，采用更换培养基的方法诱导得到De-MSCs，并对De-MSCs鉴定后用于实验。（1）比较MSCs与De-MSCs的成骨分化潜能，用CCK8法检测MSCs与De-MSCs成骨诱导7d过程中的增殖效率；MSCs与De-MSCs进行成骨诱导7d后分别得到Ob-MSC

7、s和Re-MSCs，实时荧光定量PCR（q-PCR，SYBRGreen法）检测成骨相关基因的表达；ALP染色比较MSCs与De-MSCs成骨分化的效率。（2）采用流式细胞术（FCM）检测MSCs，Ob-MSCs，De-MSCs和Re-MSCs表面协同刺激分子的表达情况；并将4种细胞与T细胞进行共培养，CCK8法检测T细胞的增殖，检测MSCs与De-MSCs在体外成骨分化过程中免疫原性的改变。（3）将丝裂霉素C处理的MSCs，Ob-MSCs，De-MSCs和Re-MSCs通过皮下植入免疫BALB/c小鼠，免疫5d后，眼眶静脉取外

8、周血，采用FCM检测外周血单核细胞（PBMCs）中免疫细胞群的活化情况；免疫7d后，采用FCM检测小鼠脾脏细胞中免疫细胞群的活化情况，检测MSCs，Ob-MSCs，De-MSCs和Re-MSCs对小鼠的致敏情况。（4）实时定量PCR（q-PCR，Taqman探针法）检测MSC