去卵巢对sd大鼠mscs多向分化能力的影响

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1、中国细胞生物学学报ChineseJournalofCellBiology2012,34(1):61–66http://www.cjcb.org去卵巢对SD大鼠MSCs多向分化能力的影响杨丽1王攀攀2张荣华1*12(暨南大学药学院,广州510632;暨南大学医学院,广州510632)摘要通过比较有、无诱导条件下正常与骨质疏松症(OP)大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)骨向、脂向及软骨向的分化情况,观察去卵巢对SD大鼠MSCs多向分化能力的影响。实验分为四组:正常组、正常诱导组、OP组、OP诱导组;分别在有或无成骨、成脂、成软骨诱导条件下,

2、评价各组的分化情况。检测发现,无诱导条件下,正常大鼠MSCs骨向及软骨向分化的能力强于OP大鼠,而OP大鼠MSCs的脂向分化能力强于正常大鼠;诱导条件下,正常大鼠MSCs对骨向及软骨向诱导剂的反应能力强于OP大鼠,而OP大鼠MSCs对成脂诱导剂的反应能力强于正常大鼠。这些结果表明,去卵巢后大鼠MSCs骨向分化能力及对成骨诱导剂的反应力下降,脂向分化能力及对成脂诱导剂的反应力增强,对软骨诱导剂的反应力下降。关键词骨髓间充质干细胞;大鼠;骨质疏松;多向分化骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)制而成,4ºC

3、保存;(2)成脂诱导液:由含10%胎牛血清、是在骨髓中发现的一种起源于中胚层、具有自我复1μmol/L地塞米松、10μg/mL胰岛素、200μmol/L消炎制和多向分化潜能的非造血干细胞。本实验以双痛、0.5mmol/LIBMX的高糖DMEM无菌过滤配制侧卵巢切除法复制骨质疏松症(osteoporosis,OP)大而成,4ºC保存;(3)成软骨诱导液:由含2.5%胎牛血清、-7鼠模型,通过比较正常和OP大鼠MSCs在有、无诱10mol/L地塞米松、37.5μg/mL维生素C、6.25μg/mL胰导条件下骨向、脂向及软骨向分化能力的差异

4、,观岛素、50ng/mLTGF-β1的低糖DMEM无菌过滤配制察去卵巢对SD大鼠MSCs多向分化能力的影响,从而成,4ºC保存。MSCs角度诠释了患者罹患OP后机体内的病理学改变。1.2.2动物分组及模型复制20只10月龄SD雌性大鼠随机分成模型组和假手术组,每组10只,模型组1材料与方法SD大鼠行双侧卵巢切除后再饲养3个月复制OP大鼠1.1材料模型,假手术组大鼠找到卵巢但不切除。手术3个月后1.1.1实验动物清洁级(SPF)10月龄SD雌性大采用双能X线骨密度仪检测大鼠骨密度,显示OP组大鼠(体重(350±10)g),由四川省医学科

5、学院实验动物鼠骨密度较正常组显著降低,证明OP模型复制成功。研究所提供,合格证号:(川)2004-16scxk。1.2.3MSCs的分离、培养及传代采用全骨髓1.1.2主要试剂DMEM培养基(美国Gibco),地贴壁法分离大鼠MSCs,依据梭形细胞形态、细胞表塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、胰岛素、吲哚美辛、达表面抗原CD29和CD44、不表达CD34和CD45以IBMX(美国Sigma),TGF-β1(澳大利亚CellScience公及细胞可以向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化司分装),碱性磷酸酶检测试剂盒(南京建成生物工的特性鉴

6、定细胞。接种24h后首次半量换液,之后每程研究所),大鼠I型胶原ELISA试剂盒(美国ADL诊3d换液一次。待细胞达到80%~90%融合后,以1:2比断实验室),骨钙素放射免疫分析药盒(解放军总医例传代。院科技开发中心放免所),甘油三酯测定试剂盒(浙1.2.4MSCs分组按MSCs来源及是否添加诱导江东瓯生物工程有限公司)。条件分为以下四组:正常组(正常大鼠MSCs未加诱1.2方法1.2.1主要试剂配制方法(1)成骨诱导液:由含收稿日期:2011-06-28接受日期:2011-10-1910%胎牛血清、10-8mol/L地塞米松、10

7、mmol/Lβ-甘油国家自然科学基金(No.30772885)和国家中医药管理局中医药科学研究专项(No.04-05JL19)资助项目磷酸钠、50μmol/L维生素C的高糖DMEM无菌过滤配*通讯作者。Tel:020-85220023,E-mail:tzrh@jnu.edu.cn62·研究论文·导条件),正常诱导组(正常大鼠MSCs添加成骨、成小盖玻片的6孔板中,共4组,3个时间段(7,14,21d),脂、成软骨诱导液),OP组(OP大鼠MSCs未加诱导每组3个复孔。待细胞接种24h后,换入无血清培养条件),OP诱导组(OP大鼠MSC

8、s添加成骨、成脂、基,待细胞周期同步化24h后正常组加入高糖完全培成软骨诱导液)。养液,诱导组加入脂向诱导液,每孔终体积2.5mL。1.2.5骨向分化能力的比较(1)碱性磷酸酶(alka-每3d换液一次,连续干预21d。