缺氧促进MSCs成脂分化的机制研究

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1、硕士学位论文密级缺氧促进MSCs成脂分化的机制研究Efjfectsofhypoxia0nadipogenicdi∞ferentiationofMSCs作者姓名：学科专业：学院(系、所)：导师：江琛遗传学肿瘤研究所侵袭与转移实验室向娟娟副研究员论文答辩日期坐2．口l答辩委员会主席中南大学二。一二年十一月原创性声明m㈣⋯洲Ⅲ哪0哪洲川舢0Y2423781本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成

2、果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。、，y刃．．作者签名：冱型雏日期：压丛L年监月啦日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提

3、供信息服务。日期：2盟年堡月硕士学位论文中文摘要摘要间充质干细胞(MesenchymalStemCell，MSCs)是肿瘤微环境的重要组成成分，对肿瘤侵袭和转移发挥重要的影响。同时肿瘤微环境对于间充质干细胞的分化和功能也产生重要的影响。两者之间构成复杂的调控网络。缺氧是肿瘤微环境的一个重要环境因素。本研究拟研究缺氧对MSCS的分化潜能的影响，并探寻参与作用的重要调控分子。【缺氧抑制MSCs成骨分化，促进MSCs成脂分化】MSCs具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的潜能。我们将MSCs在O．2％02的缺氧条件下分别使用诱

4、导培基和普通培基处理人骨髓来源MSCs3天，应用碱性磷酸酶染色和油红O染色后观察细胞内成骨细胞标志性的酶以及脂滴形成积累情况，并用Real．timePCR法检测MSCs的成骨细胞和脂肪细胞标志分子的表达，结果表明在缺氧条件了MSCs的成骨分化潜能降低；成脂分化潜能增高。【缺氧MSCs成脂分化的调控网络构建】我们应用Real．timePCR芯片筛选缺氧条件下差异表达的MSCs成脂分化相关分子。筛选出10个上调分子，11个下调分子。我们把差异表达的分子构建了缺氧条件下的MSCs的成脂分化的调控网络。结果发现C／EBP

5、家族和P岫处于调控网络的中心位置，调控多个成脂相关基因表达。本论文受到如下课题资助：国家自然科学基金(30971497，81272255)，湖南省自然科学基金(10”7003)，中南大学研究生学位论文创新基金(2011ssxt259)T硕士学位论文中文摘要【缺氧MSCs成脂分化相关调控因子的确定】我们进一步验证了在缺氧条件下MSCs的成脂分化关键转录因子PPAR吖表达下调，转录因子C／EBPs表达明显增高。同时对MSCs使用PPAR．Y抑制剂或C／EBPs抑制剂后在缺氧条件下进行成脂分化实验，在细胞水平和分子水平

6、检测MSCs的成脂分化水平，结果表明PP撩Y的抑制剂不能抑制缺氧下MSCs的成脂分化。应用C／EBPs的抑制剂可以明显抑制缺氧条件下的MScs的成脂分化潜能。因此我们认为在缺氧条件下，MSCs通过PPAR．Y非依赖性通路促进成脂分化。转录因子C／EBPs在缺氧MSCs成脂分化过程中发挥重要的作用。为了明确Hifl仪在缺氧环境下，对于MSCs的成脂分化潜能的影响，我们建立了H搏1仪的sM斟A稳定表达MSC细胞株。Hifl仅表达封闭的MSCs在细胞水平上没有明显降低MSCs在缺氧下形成的脂滴数量，但是能降低部分成脂相

7、关分子的表达。结果表明缺氧对于MSCs的成脂分化潜能的促进部分依赖于HiflQ。C／EBPs抑制剂和Hifl0【封闭同时作用下，MSCs在缺氧下的成脂分化程度相较于单独使用C／EBPs抑制剂被更加强烈地抑制，提示Hi‘1C【和C／EBPs在缺氧下存在相互作用机制，协同作用促进MSCs成脂分化。综上所述，缺氧对MSCs成脂分化有促进作用；该促进作用不依赖于P脚心丫途径；C／EBPs在缺氧促进MSCs成脂分化的过程中扮演了关键角色，Hifl仅和C／EBPs在缺氧下条件下存在相互作用，II硕士学位论文中文摘要协同作用促

8、进MSCs成脂分化。该研究阐明了在缺氧的微环境下的MSCs分化潜能的改变，为进一步研究分化后的MSCs对于肿瘤细胞的影响提供依据。关键词：缺氧，间充质干细胞，成脂分化III硕士学位论文英文摘要ABSTRACTMesenchymalstemcells(Mscs)constituteanimpoIrtantcomponentofthetumormicroenVironment