β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究-论文.pdf

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1、世界科学技术一中医药现代化★中医研究／[；一榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究六欧阳俊，沈洪，，刘军楼2，刘亚军一，谷静(1．南京中医药大学第一临床医学院南京210029；2．江苏省中医院南京210029)摘要：目的：研究中药莪术提取物一榄香烯对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡，以及小鼠肝癌H22荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞，MrlT法检测一榄香烯对细胞增殖的影响，AnnexinV—FITC／PI双染检测细胞凋亡。通过建立H22小鼠肝癌荷瘤模型，观察一榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：卢一榄香烯对HepG2细胞具有抑制增殖的作

2、用，呈剂量和时间的依赖性；AnnexinV—FITC／PI法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同，各药物浓度组Caspase一3蛋白均上调(P

3、MPI一1640培养液(WISENT每年约有6千万人确诊为此病【1J。目前临床治疗该公司，批号：350000一CL)，胎牛血清(Hyclone公司，病主要方法为手术、化疗和放疗，但这些治疗方法MYB0814)，MTY试剂盒、AnnexinV—FITC细胞凋亡会带来严重的不良反应，因此迫切需要一种低毒副检测试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司，批号作用的药物。一榄香烯是从中药莪术中提取的有效分别为：KGA311，KGA106)，一actin(ABCAM公司，批抗癌药物，其为非细胞毒性的抗肿瘤药物，能明显号：#4970)，一抗NF—KBP65、Caspase一3、辣根过氧化抑制肿瘤细胞的增殖[2

4、1，其通过阻止肿瘤细胞的细物酶(HRP)标记的二抗(CellSignaling公司，批号分别胞周期并促进肿瘤细胞凋亡来实现【3J。笔者通过观察为#8242，#9665，#707492)，BCA蛋白定量试剂盒(碧一榄香烯对人肝癌细胞HepG2及小鼠肝癌H22细胞云天公司，批号：P10010S)，Marker、ECL发光盒(，nle卜的增殖抑制及凋亡情况，为进一步证实一榄香烯通mo公司)，PVDF膜(Millipore公司)。过诱导肿瘤细胞凋亡实现抗肿瘤提供参考依据。1．2动物与细胞株昆明小鼠，雄性，体质量l4—16g(中国人民解1材料放军军事医学科学院实验动物中心)，动物许可证1．1试剂号：S

5、CXK一(军)2007—004；HepG2细胞株(东南大学一榄香烯乳(大连华立金港药业有限公司，国免疫实验室馈赠)；小鼠肝癌H22细胞株(购自ATCC北京北纳创联生物技术研究院)。收稿日期：2013—12—08修回日期：2014一O1一O4★江苏省中医药管理局领军人才培养资助项目(LJ200901)：黄芪多糖及届一榄香烯提高消化系肿瘤细胞免疫原性并增强免疫应答的机制研究，负责人：沈洪；江苏省中医院院级课题资助项目(Y11004)：通过PI3K／PKB信号传导途径上调自噬活性进而增强肿瘤抗原提呈能力的13一榄香烯抗肝癌免疫机制研究，负责人：沈洪，刘亚军。★★通讯作者：沈洪，教授，主任医师，博士

6、生导师，主要研究方向：消化系疾病的中医药防治及机制研究。(WorldScienceandTechnology~odernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedwa]7382014第十六卷第四期*Vo1．16No．41．3仪器2．4一榄香烯乳对昆明荷瘤小鼠的影响细胞超净台(苏州市华宁净化设备有限公司，通过腹腔注射H22细胞悬液，在昆明小鼠体内型号：BSC一1300一Ⅱ一B1)；恒温细胞培养箱(SANYO传代H22细胞，6天后抽取小鼠腹水，以1500rpm公司，型号：MCO一15AC)；低速台式离心机(北京京离心5min，调整细胞密度为1

7、．0x106个／mL，注射细立离心机有限公司，型号：LD24—1．2)；流式细胞仪胞悬液0．2mL至昆明小鼠右腋皮下，全程严格无及分析软件；垂直电泳仪、转膜仪(Bio—Rad公司)。菌操作。将40只荷瘤小鼠随机分为4组，每组lO以上实验仪器由南京中医药大学第一临床医学院只，分别为模型组，一榄香烯低、中、高剂量组。造模临床医学实验研究中心提供。24h后，根据小鼠的体质量，接受为期14天的灌胃治疗：一榄香烯高剂量