TRAIL通过内质网应激对肝星状细胞凋亡的调控及部分机制的研究-论文.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUnlversltatisMedicinalisAnhui2014Jul；49(7)·863·◇基础医学研究◇TRAIL通过内质网应激对肝星状细胞凋亡的调控及部分机制的研究李晓慧，李俊，黄艳，黄成，王雅蕊，一，王欢，一，孙仕伟．一，黄蒙蒙，摘要目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体因子相关凋亡诱导配体(TNF．relatedapoptosisindu．(TRAIL)与内质网应激(ERS)相关蛋白对大鼠肝星状细胞cing-ligand，TRAIL)，诱导活化的HSC凋亡，但其诱系(HSC—T6)凋亡的影响及内在联系。方法体外血小板源导HSC凋亡机制还不明确

2、。实验室前期研究显性生长因子(PDGF)诱导活化的肝星状细胞(HSC)，再分别示内质网应激(endoplasmicreticulumstress，ERS)加入TRAIL与ERS诱导剂衣霉素(TN)处理后，Hoechst也参与HSC凋亡，ERS可通过标志性蛋白CCAAT／33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡变化；RT—PCR法检增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT／enhancerbinding测mRNA的表达；Westernblot检测蛋白表达变化。结果proteinhomologousprotein，CHOP)和葡萄糖调节蛋与PDGF诱导活化的flSC组作为对照组比较，荧光

3、显微镜白78(glucoseregulatedprotein78，GRP78)调控观察到TRAIL与TN分别处理的HSC，Hoechst33258染色细胞呈核固缩等凋亡形态变化，同流式细胞仪检测结果；与对TRAIL受体DIL5的表达，说明ERS有可能参与照组相比，RT-PCR和Westernblot结果显示，TRAIL组与TNTRAIL调控的凋亡机制。TRAIL调控HSC凋亡是组细胞凋亡基因BaxmRNA、凋亡蛋白C．Caspase-3的表达明否通过ERS途径还未见文献报道。因此，该研究以显上调，而且ERS蛋白C·Caspase-12、CHOP、GRP78的表达大鼠肝星状细胞

4、系(HSC．T6)为研究对象，探讨均明显上调。结论TRAIL能通过明显上调凋亡基因BaxTRAIL与ERS相关蛋白对HSC凋亡的影响及内在mRNA、凋亡蛋白C．Caspase．3的表达，诱导PDGF活化的联系，为HF的治疗提供新思路。HSC凋亡，其机制可能与诱导ERS相关蛋白CHOP、GRP78、Caspase一12的表达有关。1材料与方法关键词肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；肝星状细胞；内1．1细胞系大鼠HSC—T6购自中国科学院上海质网应激；凋亡；Caspase-12细胞库。以10％胎牛血清、100kU／L青霉素和100中图分类号R575．2mg／L链霉素的DMEM高糖培养

5、基，在37oC、5％文献标志码A文章编号1000—1492(2014)07—0863—05CO：饱和湿度恒温培养箱条件下常规培养。取对数生长期细胞用于实验。肝纤维化(hepaticfibrosis，HF)是多种慢性肝1．2主要试剂胎牛血清购自杭州四季青公司；病发展的共同病理基础，其中心环节是静止的肝星DMEM高糖培养基购自美国Hyclone公司；TRIzol、状细胞(hepaticstellatecell，HSC)活化增殖，导致以MML—V逆转录试剂盒购自美国Invitrogen公司；RT-胶原为主的细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)PCR扩增试剂盒

6、购自13本TaKaRa公司；RT—PCR引过度沉积⋯。近来研究显示，HSC在HF的形成物由上海生工生物工程技术服务有限公司；RIPA、和逆转过程中起关键作用。因此，促进活化的HSCHoechst33258染料和苯甲基磺酰氟(PMSF)和非选凋亡是防治HF的重要手段。研究表明，HF逆择性Caspase抑制剂(Z—VAD—fkm)购自碧云天公司；转期枯否细胞(kuffercell，KC)分泌大量的肿瘤坏死丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、衣霉素购自美国Sigma2014—02—17接收公司；兔抗Caspase．3多克隆抗体购自美国CellSig-基金项目：国家自然科学基金(编号：8107

7、2686、81273526、nal公司；兔抗CHOP多克隆抗体购自美国Bioworld81102493)；高等学校博士学科点专项科研基金(编号：公司；B．actin多克隆抗体购自美国SantaCruz公司；20103420120001)；安徽医科大学2013年国家级大学生辣根酶标记抗兔和抗鼠IgG购自北京中杉金桥生物创新创业训练计划(编号：201310366030)技术有限公司；ECL化学发光试剂盒购自美国作者单位：安徽医科大学药学院、肝病研究所，合肥230032Pierce公司。作者简介：李晓慧，女，