FISH技术对自然流产患者胎盘绒毛染色体数目的检测结果分析.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第15期·临床研究·FISH技术对自然流产患者胎盘绒毛染色体数目的检测结果分析厉吉霞，王延桂，夏西燕，李曙晨。吴海霞，庄学伟(1烟台市烟台山医院，山东烟台264001；2济南护理职业学院；3山东大学齐鲁医院)摘要：目的观察自然流产患者胎盘绒毛染色体数目及荧光原位杂交(FISH)技术在染色体数目检测中的应用情况。方法收集42例不明原因自然流产患者的胎盘绒毛，采用FISH技术以GLP13／GLP21、GLP16／GLP22、CSP18／CSPX／CSPY三组探针进行染色体数目检测。结果42例中检测出染色体数目异常l8例(42．85％)，其中三体型8例(19．o4％)、

2、三倍体3例(7．14％)、四倍体2例(4．76％)、单倍体5例(11．91％)；29例首次流产和13例复发性流产者中分别有11例(37．93％)、7例(53．85％)检测出染色体数目异常，两者比较，P<0．05(=5．153)。结论自然流产者胎盘绒毛染色体数目异常率较高(尤以复发性流产者为著)，FISH技术检测染色体数目有助于某些疾病的产前诊断。关键词：荧光原位杂交；自然流产；胎盘绒毛；染色体数目异常doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2014．15．014中图分类号：R394．3文献标志码：B文章编号：1002—266X(2014)15-0042．02自然流产为常见

3、疾病，发病原因较多，其中染色20min；缓慢加入固定液2mL，吹打混匀后l500r／体异常尤其是数目异常引起者占5O％以上_1J。荧min离心10min，去上清后再重复2次，离心后去上光原位杂交(FISH)技术是一种具有高度灵敏性和清，于沉淀物中加1～2mL冰醋酸，消化lmin后制特异性的染色体和基因分析技术，可选择的标本范备成细胞悬液滴片，于56cC老化玻片2h以上。②围广泛(包括胎盘绒毛、羊水、脐血、孕妇外周血及玻片预处理及变性杂交：室温下，将玻片于2×SSC宫颈冲洗液)，目前广泛用于染色体异常的产前诊溶液中漂洗5min，37oC下于0．08mg／mL胃蛋白酶断，并逐步发展到植入前遗传

4、学诊断。2011年8月中消化5min，再于2×SSC溶液中漂洗5min，依次一2014年1月，我们应用FISH技术对45例不明原在70％、85％、100％的梯度乙醇中脱水各3min，干因流产患者进行了l3／16／18／21／22／x／Y染色体数燥；探针在杂交仪共变性(75℃，5min)，杂交(42目异常检测，旨在为分析自然流产原因提供依据。℃，16h)。③玻片洗涤：2×SSC溶液中洗涤l01资料与方法min，转入0．1％的NP-40洗涤5min，用70％乙醇洗1．1临床资料同期收治的不明原因自然流产者涤3min。④复染：用联咪二苯吲哚(DAPI)复染。42例，年龄23—37岁(平均28岁)

5、，妊娠时间6～⑤结果判读：每组探针计数100个细胞，正常细胞>20¨周。其中首次流产29例、复发性流产l3例(290％提示指标正常、异常细胞>60％提示指标异常，次流产9例、3次以上流产4例)。42例均留取胎盘介于两者之间者加大计数再判定。绒毛组织待检。1．3统计学方法采用简明统计(CS14．0)软件进1．2染色体数目检测采用13／16／l8／21／22／X／Y行数据处理。率的比较行。检验，P≤0．05为差异染色体数目检测试剂盒GLP13／GLP21、GLP16／有统计学意义。GLP22、CSP18／CSPX／CSPY。具体步骤：①玻片制2结果42例中18例(42．85％)检测出染色体数目

6、异备：检测标本以生理盐水洗净后剪碎，置于5mL浓度为0．075mmol／L的KC1低渗溶液中，37℃水浴常，其中三体型异常8例(19．04％)，包括13三体1例(2．38％)、16三体5例(11．90％)、22三体2例(4．76％)，未见l8三体及21三体；三倍体异常3例基金项目：山东省人口和计划生育委员会科学技术研究项目(260101O5O70913)。(7．14％)；四倍体异常2例(4．76％)；单倍体异常5通信作者：吴海霞例(11．91％)，其中x单体4例、2l单体l例。首次42山东医药2014年第54卷第15期流产和复发性流产者中分别有11例(37．93％)、7比例最低。此与文献报

7、道相符。例(53．85％)检测出染色体数目异常，两者比较，P有关流产次数与胚胎染色体异常发生率关系的<0．05(=5．153)。研究¨结论不一。本研究显示，复发性流产者染3讨论色体数目异常率显著高于首次流产者。提示自然流FISH技术为新兴的分子细胞遗传学技术，其原产的次数与胚胎染色体数目异常可能有关。染色体理是利用荧光标记的DNA探针与被检测样本中结构异常是染色体断裂和重排的结果，一般比例