abl融合基因阳性的CML细胞表面形态的改变.pdf

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1、658军事医学2014年8月第38卷第8期MilMedSci，Vol38，No8，Aug，2014温热刺激致bcr／abl融合基因阳性的CML细胞表面形态的改变高炳华，董利平，胡亚丽，焦保良，王新生。[关键词]慢性粒细胞白血病；bcr／abl融合基因；扫描电匀，滴至玻片的待杂交处，盖上盖玻片，封片。将玻片放至湿镜；热疗盒，置78℃水浴锅预温5min，移至42℃培养箱杂交过夜，洗[中图分类号]R733．72[文献标志码]A片，复染，放入4~C冰箱中10min左右，在荧光显微镜下观察。[文章编号]1674-9960(2014)08-0658-021．4超微结构观察DOI：10．764

2、4／j．issn．1674—9960．2014．08．023采集经FISH技术检测bcr／abl融合基因阳性患者血液，8mL／例，肝素抗凝，采用淋巴细胞分离液获取单个核细胞，肿瘤热疗(hyperthermia)是通过多种方式提高人体中的PBS冲洗离心后，加入4mlPBS，吹打混匀，平均分装于4只恶性组织细胞的温度并维持一定时间，导致癌细胞功能不可试管。1只试管用于对照组，采用37℃恒温水浴箱中热刺激逆损伤或增加细胞对药物的敏感性，从而加速癌细胞的凋亡30min；另外3只试管为实验组，分别置于40、42、44℃恒温或死亡。我们在前期研究中发现，温热刺激K562细胞水浴箱中热刺激30

3、min，离心收集细胞制备细胞滴片。将涂可增高细胞热休克蛋白和胱天蛋白酶(caspase)-3的表达，有细胞的盖玻片放入2．5％戊二醛固定10min，PBS液洗2提示温热刺激可能诱导K562细胞凋亡。而温热刺激次，5min／次，梯度乙醇脱水，每次10min，叔丁醇置换，冷冻bcr／abl融合基因阳性的慢性粒细胞白血病(chronicmyeloid干燥仪ES一2030(日本日立公司)干燥3h后，将盖玻片置于~ukemia，CML)患者的粒细胞也出现热休克蛋白的表达升E．1010型离子溅射仪(日本日立公司)进行金属镀膜处理高。在CML中，bcr／abl融合基因表达p210融合蛋白，90

4、S，再用S-3400型扫描电镜(日本日立公司)观察。其具有异常活跃的酪氨酸激酶活性，可激活多条信号转导通2结果路，导致细胞过度增殖，抑制细胞凋亡J。本研究采用温热处理bcr／abl融合基因阳性的CML患者的粒细胞，采用扫描2．1骨髓涂片结果电镜观察细胞表面形态结构的变化，为CML的热疗研究提骨髓涂片显示，骨髓有核细胞增生极度活跃；粒细胞系供理论基础。极度增生，部分中晚幼粒细胞颗粒减少，嗜酸性粒细胞比例增多；红细胞系增生受抑，但无明显形态异常；淋巴细胞比例1材料与方法减低，形态正常；巨核细胞分布正常。符合CML骨髓象特1．1主要材料与试剂征。骨髓标本和血液标本均采集于我院血液科收治

5、的初诊2．2FISH检测bcr／abl融合基因CML患者，共8例，遵照伦理学法规并获得患者的知情同GLPBCR探针为位点特异性探针，杂交于22号染色体意。bcr／abl融合基因检测试剂盒购自北京金菩嘉医疗科技22ql1．2，覆盖主要断裂点以上的部分bcr基因，荧光信号为有限公司，河北北方学院生命科学中心电镜室完成扫描电镜绿色；GLPABL为位点特异性探针，杂交信号位于9号染色标本制备及观察。体9q34，覆盖整个abl基因及ass基因，荧光信号为红色。正1．2骨髓涂片检查常细胞信号显示方式为2红2绿，bcr／abl融合基因阳性细患者局麻后于髂后上棘行骨髓穿刺术，抽取骨髓，制作胞为2

6、红1绿1黄或1红1绿1黄。FISH结果显示7例为骨髓涂片。骨髓涂片采用Wright-Giemsa染色，光学显微镜bcr／abl融合基因阳性。观察，进行诊断。2．3温热刺激后细胞表面形态变化1．3FISH技术检测bcr／abl融合基因对照组采用37℃恒温水浴30min，可见细胞形态规整，穿刺抽取患者3rIll骨髓，肝素抗凝，新鲜配制的甲醇：细胞膜完整，细胞表面微绒毛分布较均匀，呈鹅卵石状，表现冰醋酸(3：1)固定液进行固定，制备细胞滴片，老化后乙醇为粗而短特点，贴壁侧可见些许较细突起。细胞经40~(2恒梯度脱水。参照bcr／abl融合基因检测试剂盒说明及文献资温水浴30min，可见

7、细胞形态仍较规整，细胞膜上有较少细料进行操作。探针处理：每份标本加探针、杂交缓冲液混小孔洞形成，细胞表面微绒毛分布虽然也较均匀，但突起形状发生改变，突起变高、变细。细胞经42~C恒温水浴30min，[基金项目]河北省科技支撑计划项目(11276103D．10)可见细胞形态发生轻微变形，细胞膜出现损伤改变，细胞膜[作者简介]高炳华，女，主任医师，研究方向：慢性粒细胞白血病的上有较多细小孔洞形成，细胞表面微绒毛分布不均，突起形诊治，E—mail：gaobinghuaxueye@sin