-小鼠模型的构建.pdf

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1、中国现代医生2014年8月第52卷第23期·基础实验研究·PSGL-1一；IL-2一小鼠模型的构建亓翠玲’叶杰杨扬李斌何晓东’李江超章倩倩，黄韧王丽京1．广东药学院血管生物学研究所，广东广州510006；2．广东省实验动物检测所。广东广州510663【摘要】目的构建PSGL一1；IL一2小鼠模型。方法将白介素2敲除(IL一2KO)小鼠与P一选择素糖蛋白配体一1敲除(PSGL一1KO)小鼠杂交，剪尾提DNA后用PCR法检测小鼠的基因型。结果IL一2KO小鼠与PSGL一1KO小鼠杂交三代后，PSGL一1u-；IL一2-~-d~鼠

2、模型构建成功。结论将IL一2KO小鼠与PSGL一1KO小鼠杂交三代后，成功建立了PSGL一1；IL一2小鼠模型。【关键词】P一选择素糖蛋白配体-1；白介素-2；P一选择素糖蛋白配体一1敲除小鼠；白介素一2敲除小鼠；动物模型[中图分类号】R一332【文献标识码】A[文章编号】1673—9701(2014)23一O00Z一03Theconstructi0n0fPSGL一1：IL一2micemodelQ1CuilingtYEYANGY帆LIBinlHEXiaodonglLIJiangchaolZHANGQianqianlHUANG

3、Ren2WANGLijin~1．VascularBiologyResearchInstitute，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China；2．GuangdongLaboratoryAnimalsMonitoringInstitute，Guangzhou510663，China[Abstract】0bjectiveToconstructthePSGL-I~-；IL-24-micemode1．MethodsPSGL-1KOmicewerematedwithI

4、L一2KOmice．MiceweregenotypedbyPCRaftercutthetailandextractedDNA．ResultsAfterPSGL-1KOmicebeingmatedwithIL一2KOmiceforthreegenerations．PSGL一1u-：IL一2micewereobtained．ConclusionPSGL—I~-；IL一2miceareestablishedthroughPSGL-1KOmicebeingmatedwithIL-2KOmice．[Keywords】PSGL一1；IL

5、一2；PSGL一1knockoutmice；IL一2knockoutmice；Animalmodel基因工程小鼠(geneticallyengineeredmouse，GEM)1材料与方法是随着细胞工程、分子生物学的发展，利用基因打靶、1．1材料来源转基因、嵌合体等技术对实验小鼠基因组有目的的改1．1．1实验动物及饲养P一选择素糖蛋白配体一1敲除造或修饰．使小鼠有特定的特性或生物表型，以研究小鼠(PSGL一1KO小鼠)和白介素一2敲除小鼠(IL一2基因的功能、调控机制及与其他基因的相互作用等ll1。KO小鼠)购自美国Jack

6、son实验室。共4只，雌雄各2基因工程小鼠还可以作为人类的疾病模型。如自发肿只，周龄6～8周。小鼠在SPF级环境中饲养，动物房瘤模型、自发动脉粥样硬化模型等，研究疾病的发病温度控制在22℃～28℃，湿度为50％一70％，并且保持机制和药物研究。基因工程小鼠包括基因敲除小鼠、12h明／12h暗。小鼠的饲料购自广东省医学实验动基因替换小鼠和转基因小鼠[Z31。本实验所用的两种基物中心并经印Co辐照灭菌的全营养饲料。饮用水高压因工程小鼠为基因敲除小鼠，分别是白细胞介素一2灭菌。实验设计时间为2013年6月一2014年3月。敲除小鼠

7、(IL一2KOmouse)和P一选择素糖蛋白配体一11．1．2试剂PCR引物由广州英骏公司合成，蛋白酶K敲除小鼠(PSGL一1KOmouse)。为了进一步研究白细及dNTP购自Sigma公司，Taq酶、s饱和酚及氯仿胞介素一2和P一选择素糖蛋白配体一1在炎症、心血管从广州康龙公司订购。及肿瘤疾病中的共同作用，将IL一2KO小鼠和PS—1．2方法GL一1K0小鼠杂交建立了PSGL一1基因敲除及IL一21．2．1IL一2基因的鉴定突变型IL一2引物的序列：为杂合子的PSGL—l：IL一24-／b鼠模型。可以再利用TCGAATTC

8、GCCAATGACAAGACGCT：野生型此小鼠模型建立各种炎症、心血管及肿瘤等疾病模IL一2引物的序歹U：CTAGGCCACAGAATTGAAA—型，所以此模型可作为研究PSGL一1和IL一2在炎症、GATCT；通用引物序列：GTAGGTGGAAATTCT心血管和肿瘤中作用及相互关系的良