miR-195表达在乳腺癌细胞对阿霉素药物敏感性中的意义.pdf

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1、检验医学与临床2014年8月第11卷第15期LabMedClin，August2014，Vo1．1l，No．15·2043··论著·miR一195表达在乳腺癌细胞对阿霉素药物敏感性中的意义杨舸。，蒋鸥，吴道全，袁平衷，李传达，翁亚光，朱静，田杰(1．泸州医学院附属内江市第二人民医院，四川内江641000；2．重庆医科大学检验医学院，重庆400014)【摘要】目的调控mi195在乳腺癌细胞中的表达对阿霉素药物(ADR)敏感性的影响及其作用机制进行研究。方法利用脂质体将成熟miR-195模拟物(miR-195

2、mimic)及阴性对照转染至乳腺癌细胞MCF-7，采用实时定量聚合酶链式反应(RT—PCR)检测细胞中miR一195的表达变化；采用MTT比色法及流式细胞术(FCM)检测转染miR一195模拟物及其对照经ADR作用后细胞的增殖及凋亡；Western-blot检测细胞中Raf_1、P-gp、Bcl-2蛋白的表达。结果转染miR一195mimic后，明显上调了细胞中miR-195的表达水平(P<0．01)；在miR一195mimic与ADR联合作用后，明显抑制了细胞的增殖，其敏感性与对照组相比，提高近2．5倍

3、(P<0．05)，同时促进了细胞的凋亡(P<0．05)；Western—blot检测发现在转染miR．195mimic后，细胞中Raf-1蛋白及BcI一2、P-gp蛋白的表达显著降低(P(0．01)。结论在乳腺癌细胞中，miR-195作为抑癌基因，能够有效促进乳腺癌细胞对ADR所介导的化疗敏感性，其作用机制至少部分是通过miR一195负性调控Raf-1蛋白的表达来实现。【关键词】乳腺癌细胞；阿霉素；药物敏感性；微小RNADOI：10．3969／j．issn．1672-9455．2014．15．002文献标

4、志码：A文章编号：1672-9455(2014)15-2043—04SignificanceofmicroRNA-195expressioninbreastcancerceilstoadriamycindrugsensitivityYlANGGe。JIANGOu，WUDao—quan，LJChuan—dn，WENGYa—guang，ZHUJing。，TIANJie(1．ClinicalLaboratory，theSecondPeoplesHospitalAffiliatedtoLuzhouMedicalC

5、ollegeinNeijiangCity，Sichuan，641000，China；2．CollegeofLaboratoryMedicine，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China)[Abstract]ObjectiveStudyonthepossibilityofregulatingMicroRNA(miRNA)195expressiontoincreasethesensitivityofthebreastcancercell(MCF-7)to

6、adriamycin(ADR)anditsmechanism．MethodsTransfectthroughliposomethematureMicroRNA(miRNA)195mimicanditsnegativecontrastintoMCF-7anddetectchan—gesofMicroRNA(miRNA)195inthecellsbyReal—timePCR；detectMicroRNA(miRNA)195mimicanditscon—trastbyMTTcolorimetricmethoda

7、ndFCM，anddetectceilsreproductionandapoptosisaftertheeffectofADR；de—tectbyWestern-blottheproteinexpressionofRaf一1，P—gpandBcl一2inthecells．ResultsTheMicroRNA(miRNA)195expressioninthecellsincreasessignificantly(P<0．01)afterthetransfectionofMicroRNA(miRNA)195m

8、im—ic：thecombinedeffectofMicroRNA(miRNA)195mimicandADRsignificantlysuppressesthecellreproduction，itssensiti。vityi‘ncreasesalmost2．5times(P％0．05)incomparisonwiththecontrolgroup，andtheapoptosisrateofthecellsincreases；