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1、分离根瘤菌用的选择培养基‘许月蓉中国科学院南京土壤研究所,通常需要,在研究根瘤菌生态学时测定接种的根瘤菌株在土壤中的数量变化以了解其。,,,存活和消长情况植株感染法则是常用的方法但此法手续冗繁周期长近来有渐为耐药,菌株和某些选择性培养基分离计数法所替代之势但有些选择性培养基并不能完全阻止杂菌,,从,的生长尤其是那些铺展性强的真菌能抑制根瘤菌的生长而影响计数另一方面有些,,而在使用上受到限制,选择培养基所用的抗菌素因药源紧价格贵本文推荐的选择培养基。则可克服上述各缺点一、材料和方法一培养基和抑菌剂∀#∃∃∀!基础培养基用根瘤菌培养基
2、加硫酸盐链霉素每升培养基加硫酸盐链霉素。%,。克浓度为&∋∋(()∗∀∀,!通用选择培养基基础培养基加放线酮每升培养基加放线酮+巧克浓度为%+。,,),−本文推荐的选择培养基由基础培养基及五氯硝基苯可湿性粉剂含有效成份.+/。,多菌灵可湿性粉剂含有效成份!+/和结晶紫等三种抑菌剂组成其中除结晶紫外其余抑,混,,菌剂均在培养基灭菌后冷却至约0+℃时加入匀制成平板于1%℃烘箱中除去表面冷凝,。水备用二供试菌株!∀。耐23+(()硫酸盐链霉素的曹子根瘤菌2一.!−+∗∀菌落中央有一个白色的小圆点的若子根瘤菌0+−1。三
3、供试土壤、、水稻土采自无锡和南京黄棕壤采自南京和山东红壤采自江西及灰壤采自山。东四试验方法%.天的−。,−,将菌龄一2一.!菌株斜面培养物加灭菌水毫升及一滴分散剂吐温4+充,。∀,,分振荡摇匀制成菌悬液吸取++%毫升菌悬液移入!+/的土壤悬液中振荡!%分钟吸取∀,,.。此液++%毫升于琼脂平板上用刮刀均匀涂抹∗4℃培养天左右计数,。本文承李良说同志指正谨致谢意#根瘤菌培养基成份如下∀·∀∀葡萄糖,61+∀%克,89:;∋<克,>23‘.7?++∗克,:9:+&;%克,?/铝酸钠溶液∗毫升;/硼!+克57,3=∀酸
4、溶液,∀1!∀+克,!∗++刚果红%毫升琼脂∗+克,水!+++毫升,(7调至.+。∗毫升醉母奋+一≅!%+二、结果和讨论一选择培养基的组成、#,介培养试验结果表!∗表明!含有五氯硝基苯的培养基对真菌有明显的抑制作用尤、,、。其是对根霉毛霉和木霉真菌效果更佳但对青霉曲霉的抑制作用较少在−+毫升基础∀∀,培养基中加入。!一+0克五氯硝基苯的条件下其抑制真菌的能力几无差异∗含有多菌灵,的基础培养基其抑制真菌的能力高于含五氯硝基苯的基础培养基多菌灵含量愈高抑制作用,、愈大但此培养基对根霉毛霉和木霉等铺展性强的真菌几乎没有抑制效果
5、−含有结晶紫表!含抑菌剂的培养基对土壤真菌数量的影响个≅克干土ΒΒΒ一ΒΒ;ΒΒ一二ΒΒΑ‘生一一一进一Β’〔试一“数Α基一础培、基Α一户些恳塑燮竺Β生Α胜矛竺翌“勺擎一竺ΒΒΒΒΒ一ΒΒ#一一一∗克’。一克二二一丁二一一一Α一ΧΧΑΧΧ灰Δ恻山一东,Α根得铺满Α根瞥娜铺满Α理根每铺牛满Α根嘿哪铺满Ε”·%0⋯‘+∀0.Α’1∀∗,水稍土‘无锡,⋯“+!·%!”·‘,Α“·”!“·“%ΧΦ·“,Α“·”+Α“·“4黄棕圾‘南河,Χ‘+·%∗Α“·,1Χ“·,0Α”·∗−】一“·“∗Χ’%·044·01∀Δ#」Δ∀∀∀’,、。+红江Χ∗
6、−4Χ“ΧΧΓ笋邓民上一今毕一旅吧一一土∃。逸−+升荃础培养荃加入的抑菌剂量的基础培养基对细菌的抑制能力随其浓度而表∗%一.!−。根瘤菌株在含结晶紫的培,,异浓度高时所有细菌几乎均不能在其上生养基平板上的数量个≅克干土浓度,长低时对任何细菌均无杀伤能力只∋,∗,−,。卜十一十一/斗一.一.一二孟任一+培养荃类型1口一0毯/口一+‘!∀#!。∃,−∀10∀性一的口,口,&,2哎&∋一匕)(一#!%一有在浓度适中时即浓度在一&(()时一基础培养基一。抑制作用方有选择性通用培养基!,含结品紫3456的培养基根据上述试验结果本文
7、所推荐的选择含结晶紫7!556的培养基培养基的组成规定为#每−+毫升基础培养!9556的培养基含结晶紫8∀∀基加入!/结晶紫溶液+!一+∗毫升五氯含结晶紫#!%556的培养荃∀硝基苯可湿性粉剂+!克和多菌灵可湿,,!注:又表示菌落平均数;个<皿=>表示标准差?∀!。!性粉剂+克≅表示变异系数二选择培养基的优点!37#、抑制真菌生长从>一根瘤菌株及各种土壤悬液接种在基础培养基通用培养基,和本文推荐的选择培养基的平板上的根瘤菌和土壤真菌的生长情况;表7=来看以选择培养,>37#,因而数基抑制真菌的能力最强从而为一根瘤菌的生
8、长发育提供了有利的环境量较Α,多而通用培养基和基础培养基的抑制真菌能力较差真菌迅速生长发育而影响了根瘤菌的。生长=,,,试验还表明;表在选择培养基平板上真菌的数量不仅少而且其单菌落长势也受。,
