引进的俄罗斯高效大豆根瘤菌培养基的选择与优化-论文.pdf

《引进的俄罗斯高效大豆根瘤菌培养基的选择与优化-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、江苏农业科学2014年第42卷第3期一69一赵念力，谷维，张俐俐，等．引进的俄罗斯高效大豆根瘤菌培养基的选择与优化[J]．江苏农业科学，2014，42(3)：69-70引进的俄罗斯高效大豆根瘤菌培养基的选择与优化赵念力，谷维，张俐俐，夏善勇，赵曦，吴立成，张必弦(1．黑龙江省农业科学院，黑龙江哈尔滨150086；2．黑龙江省农业科学院生物技术研究所，黑龙江哈尔滨150086)摘要：将引进的俄罗斯高效大豆根瘤菌GF菌株在YMA、TY、PA、BSE、SM5种培养基中进行培养，相关生长情况的试验结果表明，该菌株在YMA培养基中生长较快。在

2、YMA培养基中进行的碳源利用试验表明，在葡萄糖为碳源的培养基中根瘤菌生长得最好。按Lq(3)正交设计表对YMA培养基中的4个组分比例进行优化，对结果进行分析可得最优的培养基配方(1L)为：10．0g葡萄糖+0．8g酵母粉+0．2gMgSO·7H20+0．8gK2HPO4+0．1gNaC1+0．O1gCaCI，，去离子水补足至1000mL。关键词：俄罗斯大豆根瘤菌；培养基；优化中图分类号：Q93—335文献标志码：A文章编号：1002—1302(2014)03—0069—02根瘤菌与豆科植物能形成共生的固氮体系，在自然界中，(1)YM

3、A培养基(1L)：10g甘露醇／蔗糖，1g酵母粉，0．2g这个体系不但具有最高的固氮效率，而且具有最多的固氮MgSO4·7H20，0．5gK2HPO4，0．1gNaC1，0．05gCaC12·量]。大豆根瘤菌与大豆共生可以形成根瘤，能将空气中的6H0，4mLRh微量元素液(将5gH3BO3、5gNa2MnO4溶解氮固定转化成为大豆可以直接吸收利用的铵。大豆与根瘤菌于1000mL去离子水中制成)，加去离子水至1000mL，调节的共生固氮作用既能直接改善大豆的氮素营养状况、提高大pH值6．8—7．0。(2)SM培养基(1L)：10g甘露

4、醇，0．5g豆的产量和品质，又能将更多的固定氮素释放到土壤中，从而K2HP94，0．2gMgSO4·7H20，0．1gNaC1，0．5gKNO3，0．1g起到培肥地力的作用。目前，接种根瘤菌剂已经成为世界CaC1：·6H0，4mLRh微量元素液，1mL混合维生素液(将各国豆科作物增产、减少化肥施用的一项技术措施，在许多国10mg硫胺、10mg烟酰胺、10mg泛酸钙、1mg生物素溶解于家都有大规模商品菌剂的生产和出售，应用面积也不断扩大。100mL去离子水中制成)，加去离子水至1000mL，调节pH随着无公害农业的发展，接种高效大豆根

5、瘤菌将产生更显著值6．8～7．0。(3)TY培养基(1L)：5g胰蛋白胨，3g酵母的社会与环境效益。俄罗斯对根瘤菌的研究已有近百年粉，1．3gCaC12·6H20，加入去离子水至1000mL，调节pH的历史，具有了一定的理论基础并积累了丰富的实践经值为7．0。(4)PA培养基(1L)：2g蛋白胨，0．5gMgSO·验-5]。2009年黑龙江省农业科学院从全俄大豆科学研究7H，0，加入去离子水至1000mL，调节pH值6．8—7．0。(5)所引进了十多个高效大豆固氮根瘤菌株，并结合黑龙江省的BSE培养基(1L)：10g甘露醇，0．2g

6、MgSO4·7H20，0．5g生态环境特点和大豆主栽品种进行综合研究、开发和应用。K2HPO4，0．1gNaC1，0．1gCaC12·6H20，4mLRh微量元素大豆根瘤菌通常选用YMA培养基进行分离培养，但其生长液，加入去离子水至1000mL。较慢，不适合在生产上加以应用，因此有必要研究、改良培养1．3试验方法基配方，选择最适合俄罗斯大豆根瘤菌生长的培养基配方，提1．3．1根瘤菌菌种的活化、传代、接种将根瘤菌在斜面培高大豆根瘤菌的培养速度。本研究主要通过优化俄罗斯高效养基上28℃的条件下培养2d后接种到YMA培养液中，再大豆根瘤菌

7、培养基，筛选出最适合根瘤菌生长的培养基配方，置于28oC、150r／min的摇床中振荡培养4d，制成接种液。为实现高密度发酵培养提供基础和依据。1．3．2根瘤菌的培养将培养好的接种液按照体积比1％的接种量接入5种液体培养基中，250mL三角瓶的装液量为1材料与方法100mL，在28℃、150r／rain的摇床中培养。1．1试验菌株1．3．3培养基的比较在600nm下测定不同培养时间的吸试验菌株为引进的俄罗斯大豆根瘤菌GF菌株，为大豆光度，绘制大豆根瘤菌在5种培养基中的生长曲线。快生根瘤菌，由俄罗斯全俄大豆科学研究所提供。1．3．4不

8、同碳源的筛选试验在培养基选择试验的基础上，1．2培养基进一步在生长较好的培养基上进行碳源的筛选试验。用等量试验用培养基有YMA、SM、TY、PA、BSE5种，配方如下。的甘油、乳糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖替换YMA培养基中的甘露醇，同时