黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质

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1、2015年3月四川大学学报(自然科学版)Mar．2015第52卷第2期JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition)Vo1．52No．2doi：103969／j．issn．0490—6756．2015．02．034黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质鲍小敏，卢帮敏，鲍锦库(四川大学生命科学学院，成都610064)摘要：黄牛肝茵(Boletusfulvus)经生理盐水浸提、CM—Sepharose、DEAE—Sepharose及Sephacry1S一100分子筛层析后得到黄牛肝菌凝集素(BFL)．经SDS—PAGE电泳及SephacrylS一1

2、00分子筛层析检测表明，所得的BFL是由两个分子量约15．8kDa、非二硫键相连的亚基组成的表观分子量为32kDa的二聚体．BFL可快速凝集兔血红细胞，其最低凝集浓度为3．9g／mL；糖抑制试验表明，胃粘蛋白、甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和卵清蛋白均可抑制BFL活性．当温度在70℃以下和pH值在6．O～9．8之间时，BFL凝血活性基本不变。然而当温度至9O℃以上和在极端pH值下，BFL凝血活性减弱甚至完全丧失．不同浓度的脲和盐酸胍对BFL凝血活性的影响表明：随着变性剂浓度的增加，BFL的结构逐渐被破坏．关键词：黄牛肝菌凝集素；分离纯化；凝血活性中图分类号：$646．3文献标识码：A文章编号：049

3、0—6756(2015)02—0409—07PurificationandcharacterizationoflectinfromBoletusfulvusBAOXiao—Min，LUBang—Min，BAOJin—Ku(CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064，China)Abstract：Boletusfulvuslectin(BFL)wasisolatedfromBoletusfulvus，byextraction，ion—exchangechromatographyonCM—SepharoseandDEAE—Sepha

4、rosefollowedbygelfiltrationonSephacrylS一100．BFLisahomodimerwithapparentmolecularmassof32kDaandcomposedoftwo15．8kDasubunitsthatareheldtogetherbynoncovalentinteractions．BFLcouldagglutinaterabbiterythrocyte，anditex—hibitedstronghemagglutinationactivitytorabbiterythrocytesattheconcentration3．9~tg／mL．Th

5、ere—suitofcarbohydrateinhibitionassayshowedthatthegastricmucin，thyroglobulin，ovomucoidandovalbumincouldinhibittheagglutinatingactivityofBFL．ThehemagglutinationactivityofBFLwassta—bleunder70~CandinapHrangeof6．0——9．8，whileitwasweakwhentemperaturewashigherthan9O℃andinextremepHrange．Effectsofdifferentc

6、oncentrationsofureaandGuHC1onthehemaggluti—nationactivityofBFLindicatedtheincreaseofdenaturantconcentrationcoulddestroythestructureofBFLgradually．Keywords：Boletusfulvuslectin；Purification；Hemagglutinationactivity结合专一性的蛋白质或糖蛋白，其普遍存在于自引然界动植物和微生物中[．凝集素具有广泛的生物凝集素(Lectin)是一类非酶、非免疫来源的糖学功能——“与多种生理过程诸如细胞间的

7、粘着，收稿日期2013—11—25基金项目国家自然科学基金(81173093，30970643，J1103518)作者简介鲍小敏(1989一)，男，硕士研究生，研究方向为医学分子生物学．E—mail：zhjbxm@163．corn通讯作者鲍锦库．E—mail：baojinku@SCU．edu．cn41O四11I大学学报(自然科学fit)第52卷受体介导的胞饮、细菌感染宿主、宿主巨噬细胞清mL／min的流速上柱