菲律宾蛤仔凝集素的分离纯化及抑菌活性研究.pdf

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1、第27卷第4期2012年8月大连海洋大学学报JOURNALOFDAI』ANOCEANUNIVERSI，rYV01．27No．4Aug．2012文章编号：2095—1388(2012)04-0333—05菲律宾蛤仔凝集素的分离纯化及抑菌活性研究李伟1，陈文1，佟长青1、2，孔亮3，曲敏1，谭成玉3，金桥1，李丹彤4(1．大连海洋大学食品科学与工程学院，辽宁大连116023；2．东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心，东北油墨盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨150040；3．大连海洋大学海洋环境工程学院，辽宁大连116023；4．大连海洋大学水产与生命学院，辽宁大连116023)摘

2、要：采用CelluloseDF_,52离子交换层析、SephadexG～100分子筛层析及TSKG3000PWXL凝胶色谱柱HPLC从菲律宾蛤仔Ruditapesphilippinamm中分离纯化出具有N一乙酰半乳糖酰胺(N-acetyl-O-galac-tosamine，GMNAc)和猪胃黏蛋白(Mucinfromporcinestomach，PSM)特异性的菲律宾蛤仔凝集素(简称为MCL—T)。SDS—PAGE分析结果表明，MCL—T的相对分子量为148000，含有62000和36000的亚基。抑菌试验结果表明，MCL—T对金黄色葡萄球菌Staphylococcusall,FellS和枯草

3、芽孢杆菌Bacillussubtilis有较高的抑菌活性。对MCL—T中Trp残基、一s—s一、一sH以及Tyr残基进行化学修饰后，MCL—T对金黄色葡萄球菌的抑菌活性丧失；对其一s—s一迸行化学修饰后，MCL—T对枯草芽孢杆菌的挪菌活性影响不大，而对其一SH、Trp残基和Tyr残基进行化学修饰后，MCL—T对枯草芽孢杆菌的抑菌活性丧失。研究表明，MCL—T肽链上的氨基酸残基状态与其抑菌活性有关。关键词：菲律宾蛤仔；凝集索；抗菌活性；化学修饰中图分类号：Q532文献标志码：A凝集素是非酶及非免疫的蛋白质或糖蛋白，广泛存在于海洋动物、植物和微生物中，在生物机体中起着防御作用uJ。同时，凝集素还具

4、有抗菌、促有丝分裂及抗病毒等多种生物学活性。有关海洋生物凝集素的抗菌活性已有很多报道，Gowda等旧1研究了从海参Holothuriascabra中分离的T一抗原特异性凝集素对一系列革兰氏阳性茵和阴性菌的抗菌活性，并详细研究了细菌表面杂多糖链的变化对凝集素凝集细菌活性的影响；Liao等∞1报道了从红藻中分离的凝集素具有抗海洋弧菌活性；Tasumi等Ho报道了日本鳗鱼Anguillajaponica皮肤黏液中的凝集素具有抑制大肠杆菌Escherichiacoli(K12)的活性。这些研究结果表明，海洋生物凝集素可以成为潜在的生物抗菌剂。本研究中，作者分离纯化了菲律宾蛤仔Rudi-tapesphi

5、lippinamra凝集素，对其抑菌活性进行了初步研究，并对其氨基酸残基经化学修饰后凝集素抑菌活性的变化进行了研究，旨在探索凝集素结构与抗菌活性之间的关系，为实现其在抗菌方面的应用提供参考。1材料与方法1．1材料与仪器菲律宾蛤仔购于大连兴工街农贸市场；大肠杆菌Escherichiacoli、产气荚膜梭菌Clostridiumper-fringens、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis均取自辽宁出入境检验检疫局。高效液相色谱(HPLC)：色谱柱为TSKG3000PWXL(4．6minx300ram)，柱温为室温，流动相为0．01m

6、oL／L磷酸盐(pH7．4)缓冲液。1．2方法1．2．1凝集素的分离纯化将菲律宾蛤仔研磨粉碎，用PBS(0．1moL／L磷酸盐，pH7．8，含0．15moL／LNaCl)在4℃下抽提过夜。将匀浆液离心20min(5000g)，取上清液，加入(NH。)：SO。，使其饱和浓度达到80％，静置过夜后，离心20min(5000g)，收集沉淀。将沉淀溶于0．1moL／LTris—HCI(pH7。8，含0。15mol／L5raCl)缓冲液中，收稿日期：2012—05-14基金项目：国家自然科学基金资助项目(31071612，21075012)作者简介：李伟(1964-)，男，教授，博士生导师。E-mail

7、：aisingiom@hotmaiLC01334大连海洋大学学报第27卷将溶液装入透析袋中，透析除去(NH。)：SO。后，冷冻干燥，得到凝集素粗品。用TB(0．01moL／LTris—HCl，pH7．8)缓冲液冲洗CelluloseDE52柱(0．5cm×10cm)至吸光值(A：踟。)稳定后，将粗品用少量TB缓冲液溶解后，加入到CelluloseDE52离子交换层析柱中，用含有0～1mol／LNa