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1、2015年3月四川大学学报(自然科学版)Mar.2015第52卷第2期JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition)Vo1.52No.2doi:103969/j.issn.0490—6756.2015.02.034黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质鲍小敏,卢帮敏,鲍锦库(四川大学生命科学学院,成都610064)摘要:黄牛肝茵(Boletusfulvus)经生理盐水浸提、CM—Sepharose、DEAE—Sepharose及Sephacry1S一100分子筛层析后得到黄牛肝菌凝集素(BFL).经SDS—PAGE电泳及SephacrylS一1
2、00分子筛层析检测表明,所得的BFL是由两个分子量约15.8kDa、非二硫键相连的亚基组成的表观分子量为32kDa的二聚体.BFL可快速凝集兔血红细胞,其最低凝集浓度为3.9g/mL;糖抑制试验表明,胃粘蛋白、甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和卵清蛋白均可抑制BFL活性.当温度在70℃以下和pH值在6.O~9.8之间时,BFL凝血活性基本不变。然而当温度至9O℃以上和在极端pH值下,BFL凝血活性减弱甚至完全丧失.不同浓度的脲和盐酸胍对BFL凝血活性的影响表明:随着变性剂浓度的增加,BFL的结构逐渐被破坏.关键词:黄牛肝菌凝集素;分离纯化;凝血活性中图分类号:$646.3文献标识码:A文章编号:049
3、0—6756(2015)02—0409—07PurificationandcharacterizationoflectinfromBoletusfulvusBAOXiao—Min,LUBang—Min,BAOJin—Ku(CollegeofLifeSciences,SichuanUniversity,Chengdu610064,China)Abstract:Boletusfulvuslectin(BFL)wasisolatedfromBoletusfulvus,byextraction,ion—exchangechromatographyonCM—SepharoseandDEAE—Sepha
4、rosefollowedbygelfiltrationonSephacrylS一100.BFLisahomodimerwithapparentmolecularmassof32kDaandcomposedoftwo15.8kDasubunitsthatareheldtogetherbynoncovalentinteractions.BFLcouldagglutinaterabbiterythrocyte,anditex—hibitedstronghemagglutinationactivitytorabbiterythrocytesattheconcentration3.9~tg/mL.Th
5、ere—suitofcarbohydrateinhibitionassayshowedthatthegastricmucin,thyroglobulin,ovomucoidandovalbumincouldinhibittheagglutinatingactivityofBFL.ThehemagglutinationactivityofBFLwassta—bleunder70~CandinapHrangeof6.0——9.8,whileitwasweakwhentemperaturewashigherthan9O℃andinextremepHrange.Effectsofdifferentc
6、oncentrationsofureaandGuHC1onthehemaggluti—nationactivityofBFLindicatedtheincreaseofdenaturantconcentrationcoulddestroythestructureofBFLgradually.Keywords:Boletusfulvuslectin;Purification;Hemagglutinationactivity结合专一性的蛋白质或糖蛋白,其普遍存在于自引然界动植物和微生物中[.凝集素具有广泛的生物凝集素(Lectin)是一类非酶、非免疫来源的糖学功能——“与多种生理过程诸如细胞间的
7、粘着,收稿日期2013—11—25基金项目国家自然科学基金(81173093,30970643,J1103518)作者简介鲍小敏(1989一),男,硕士研究生,研究方向为医学分子生物学.E—mail:zhjbxm@163.corn通讯作者鲍锦库.E—mail:baojinku@SCU.edu.cn41O四11I大学学报(自然科学fit)第52卷受体介导的胞饮、细菌感染宿主、宿主巨噬细胞清mL/min的流速上柱
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