现代分子荧光检测技术及应用 [兼容模式].pdf

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1、1现代分子荧光检测技术及应用王兰芬博士市场部分子光谱工程师18/02/20142荧光现象的发现•1845年，英国的弗雷德里希等人首次观察到奎宁的蓝色450nm的发光（荧光）.YellowglassofwineEmfilter>400nmBlueglassQuinineFilter<400nmSolution3发光类型PhenomenonMdfModeofexcitittiationPhotoluminescence(fluorescence,Absorptionoflight(photons)phosphorescence)(光致发光）Radioluminescence（辐射发光）Io

2、nizingradiation(X-rays)Cathodoluminescence（阳极辐射发光）Cathoderays(electronbeams)Electroluminescence（电致发光）ElectricfieldThermoluminescence（热致发光）Heatingafterpriorstorageofenergy(e.g.radioactiveirraditidiation)Chemiluminescence（化学发光）Chemicalprocess(e.g.oxidation)Bioluminescence（生物发光）Biochemical

3、processTriboluminescence（摩擦发光）FrictionalandelectrostaticforcesSonoluminescence（超声发光）Ultrasounds4荧光的发展史•1853(GGStokesG.G.Stokes)提出荧光概念•1858(E.Becquerel)首次观察到磷光•1867(F.Goppelsröder)荧光分析铝-桑色素复合物测定铝离子•1888(EE.WidWiedemann)提出发光概念•1926(F.Perrin)荧光偏振理论•1926(Gaviola)第一台荧光寿命测量仪器（相调制原理）•1935(A.Jablonski)：

4、雅布隆斯基能级图（Jablonski’sdiagram）•…5荧光的产生机理AbsorptionrsioneSexcitedstate2ylConvgaInternenerSexcitdttitedstate1FluorescenceNonradiativedissipationGroundStateGroundStateElectrons6磷光的产生机理AbsorptionergyS2ICceennsorbabAIntersystemCrossingS1T1PhosphorescenceGroundStateElectrons7JablonskiJablonskiDiagramDia

5、gram2S120A=PhotonabsorptionF=FlouresceneICT=PhosphoresceneS1S=ElectrongroupstateT02S=ElectronfirstVR1ISC210ICexcitationsingletTstate1VRS=ElectronsecondEnergy2excitdiitedsinglltttetstateT=Electronfirst1AAFTexcitedtripletstateT=Electronsecond=Electronsecond2excitationtripletstate2IC=Internalconver

6、sionIC=InternalconversionS1ISC=Intersystem00Absorption：10-15SconversioInternalconversionandvibrationalrelaxation:10Internalconversionandvibrationalrelaxation:10VRVRvibration-14=-vibration10-11SrelaxtionFluorescene:10-9-10-6S,nsorderPhosphorescene:10-3-10-2S8荧光技术中的几个基本概念荧光发射谱、激发谱、三维荧光谱量子产率荧光寿命:

7、斯托克斯位移（StokesshifStokesshift）同步谱三维光谱内滤效应（Innerfiltereffect）荧光各向异性和偏振(Anisotropyandpolarization):randP荧光淬灭FRETFRAP9荧光发射谱和激发谱ytexcitationemissionensitInWlhWavelengthexcitation：固定发射波长，激发波长扫描，观察物质发光特性的激发光依赖性emission：固定激发波长，