琼脂糖凝胶电泳原理.ppt

《琼脂糖凝胶电泳原理.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用口腔1402琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同，电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用凝胶准备胶床准备铺胶静置胶床置于电泳槽中加电泳缓冲液拔梳子上样电泳取出凝胶拍照琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用琼脂糖凝胶电泳结果分析结果初步

2、分析数量分析：条带的宽度，荧光的亮度。质量分析：纯度分子量影响因素：DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其分子量的对数成反比；琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼脂凝胶中，电泳迁移率不相同；DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大凝胶电泳结果分析常见问题原因对策DNA条DNA降解实验过程中应避免核酸酶带模糊污染。电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。TBE建议使用10就更换。所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度<30℃，巨大DNA链电泳，温度<15℃，

3、检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量DNA含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分。有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白。DNA变性电泳前勿加热，用20mMNaCl缓冲液稀释DNA。出现片状PCR扩增时出现涂抹减少酶量或更换酶，减少拖带或涂带、片状带或地毯样dNTP浓度，适当降低抹带带，往往由于酶量多Mg2+浓度，增加模板量，或者酶的质量差，减少循环次数。dNTP浓度高，Mg2+浓度高，退火温度过低，循环次数多。不规则电泳条件不合适电泳时电压不应超过DNA带20V/cm，温度<30℃，迁移巨大DNA链电泳

4、，温度<15℃，检查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换。DNA变性电泳前勿加热，用20mMNaCl缓冲液稀释DNA。带弱或无DNA上样量不够增加DNA上样量，聚丙烯DNA带酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高，上样量可适当降低。DNA降解实验过程中应避免核酸酶污染。DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。EB染色的DNA所用应用短波长（254nm）的紫光源不合适外光源。DNA带缺DNA跑出凝胶缩短电泳时间，降低电压，尖增加凝胶浓度。分子大小相近的增加电泳时间，核准正确DNA带不易分辨凝胶浓度DNA变性电泳前勿加热，用20mMNaCl缓冲液稀释DNA。DNA链巨大

5、，常规在脉冲凝胶电泳上个分析。凝胶电泳不合适。电泳时配胶的缓冲液与电泳同时配制，电泳缓冲液高ladder的缓冲液不是同出胶的1-2mm即可。扭曲时配制。电泳时电压过高电泳时电压不应超过20V/cm。琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用1、DNA的制备.⑴适合分离大片段DNA.琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.⑵可提取大分子DNA利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大的DNA

6、片段，可以完全符合构建粘粒基因组文库的要求。2、PCR产物在琼脂糖凝胶上进行的电泳检测。3、琼脂糖在其他方面的应用⑴、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。⑵琼脂糖在双链DNA探针的合成方法中的作用。