琼脂糖凝胶电泳原理步骤详细

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1、http://www.shsmu.edu.cn/李莉琼脂糖凝胶电泳AgaroseGelElectrophoresis上海交通大学医学院讲课内容概述1琼脂糖凝胶的特点2琼脂糖凝胶电泳的应用3影响迁移率的因素4琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白5上海交通大学医学院概述IntroductionGelElectrophoresis：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。特点（characteristic）：1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动2.电泳操作方法简便，电泳速度快3.分辨率高，重复性好，

2、电泳图谱清晰4.适用于生化，免疫等定性定量测定上海交通大学医学院琼脂糖凝胶（AgaroseGel）天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。琼脂糖（agarose）琼脂果胶（agaropectin）AcidsulfateCarboxylicacidgroups上海交通大学医学院D-半乳糖3，6-脱水-L-半乳糖琼脂糖（Agarose）半乳糖及其衍生物构成的中性物质上海交通大学医学院上海交通大学医学院讲课内容概述1琼脂糖凝胶的特点2琼脂糖凝胶电泳的应用3影响迁移率的因素

3、4琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白5上海交通大学医学院琼脂糖凝胶的特点（一）优点（advantage)1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定6.有热可逆性上海交通大学医学院（二）缺点(disadvantage)1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电

4、泳后必须立即固定染色4.与PAGE相比，分子筛(molecularsieve)作用小，区带少上海交通大学医学院讲课内容概述1琼脂糖凝胶的特点2琼脂糖凝胶电泳的应用3影响迁移率的因素4琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白5上海交通大学医学院琼脂糖凝胶电泳的应用ApplicationsofAgaroseGelElectrophoresis1.适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化2.临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测3.为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标上海交通大学医学院Thegelwith

5、UVillumination,theethidiumbromidestainedDNAglowsorange上海交通大学医学院Digitalimageof3plasmidrestrictiondigestsrunona1%w/vagarosegel,3Volts/cm,stainedwithethidiumbromide.TheDNAsizemarkerisacommercial1kbpladder.ThepositionofthewellsanddirectionofDNAmigrationisnoted.上海交通

6、大学医学院上海交通大学医学院讲课内容概述1琼脂糖凝胶的特点2琼脂糖凝胶电泳的应用3影响迁移率的因素4琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白5上海交通大学医学院影响迁移率的因素FactorsaffectingmigrationthesizeofthemoleculeconformationofthemoleculetheagaroseconcentrationofagelVoltage上海交通大学医学院Percentagaroseandresolutionlimits上海交通大学医学院讲课内容概述1琼脂糖凝胶的特点2琼脂糖凝胶电

7、泳的应用3影响迁移率的因素4琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白5上海交通大学医学院琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白原理（Principle）血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。上海交通大学医学院(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的组成ApoAApoBprotein：ApoproteinApoCApoDApoE甘油三酯（TG）脂类磷脂（PL）游离胆固醇（FC）胆固醇酯（CE）少量糖上海交通大学医学院上海交通大学医学院（二）分

8、类1.按电泳法分乳糜微粒（chylomicron,CM）-脂蛋白（-lipoprotein）前-脂蛋白（pre-lipoprotein）-脂蛋白（-lipoprotein）上海交通大学医学院2.按超速离心法分乳糜微粒(chylomicron,CM)(<0.94)极低密度脂蛋白(0.941.006)(verylowdensityli