dna琼脂糖凝胶电泳原理

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1、琼脂糖凝胶电泳进行DNA/RNA定量原理DNA（RNA）定量分析可用紫外光谱分析，原理是DNA（RNA）分子在260nm处有特异的紫外吸收峰，且吸收强度与DNA(RNA)的浓度成正比。此外，还可通过琼脂糖凝胶电泳上显示的DNA（RNA）带的亮度来分析，因为EB作为一种荧光染料，能插入DNA(RNA)的碱基对平面之间而结合于其上，在紫外光的激发下产生荧光，DNA(RNA)分子上EB的量与DNA分子的长度和数量成正比。在电泳时加入已知浓度的DNA（RNA）Marker作为DNA（RNA）分子量及浓度的参考，样品DNA(RNA)的荧光强度

2、就可以大致表示DNA（RNA）量的多少。这种方法的优点是简便易行，可结合琼脂糖凝胶电泳分析DNA(RNA)样品的完整性来进行，缺点是不太准。琼脂糖凝胶的配制　　根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量 EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。3．P1、P2、P3的配制P1 的配制：在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g，Na2EDTA?2H2O 3.72g，

3、用 HCl 调整 pH 至 8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。P2 的配制：在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至 1 升。P3 的配制：在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g，用冰醋酸调整 pH 值至 5.5，用去离子水调整容积至1升。4．常用缓冲液：TEpH 7.410mmol/LTris?Cl （pH7.4）1mmol/L EDTA（pH8.0）pH 7.610mmol/LTris?Cl （pH7.6）1mmol/L EDTA（p

4、H8.0）pH 8.010mmol/LTris?Cl （pH8.0）1mmol/L EDTA（pH8.0）STE（亦称 TEN）0.1mmol/L NaCl10mmol/LTris?Cl （pH8.0）1mmol/L EDTA（pH8.0）STET0.1mmol/L NaCl10mmol/LTris?Cl （pH8.0）1mmol/L EDTA（pH8.0）5%Triton X-100TNT10mmol/LTris?Cl （pH8.0）150mmol/L NaCl0.05% Tween 20电泳缓冲液Tris-乙酸（TAE）：50×

5、浓贮存液（每升）：242g Tris 碱5   7.1ml 冰乙酸100ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）使用时再稀释50倍。Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）40ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）使用时再稀释10倍。Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：54g Tris 碱27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）使用时再稀释10倍。碱性缓冲液：1×使用液（每升）：5ml10mol/

6、L NaOH2ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）Tris-甘氨酸：5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3）50ml 10%SDS（电泳级）2×SDS 凝胶加样缓冲液100mmol/L Tris?HCl（pH6.8）200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2％溴酚蓝20％甘油30％丙烯酰胺：将29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45孔径）过滤除

7、菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。10mol/L 乙酸铵：把770g 乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。1mol/LCaCl2：在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于－20℃。2.5mol/LCaCl2：在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于－20℃。1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2

8、）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃。0.5mol/LEDTA（pH8.0）：在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na?H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶