《琼脂糖凝胶电泳》PPT课件

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1、琼脂糖凝胶电泳一实验目的学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法检测水稻总DNA的纯度与分子量检测PCR的结果二实验原理电泳是分离和纯化DNA片段的最常用技术琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,沸水中溶解,45℃开始形成多孔性刚性滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度DNA分子在碱性环境中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动二实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA,分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带琼脂糖凝胶电泳法分离DNA,是利用分子筛效应,迁移速度与分子量的对数值成反比关系可依

2、据DNA分子的大小使其分离DNA分子在电泳条件下的迁移演示.exeGoodview可与DNA分子形成复合物,发射的荧光强度较游离的Goodview强度大10倍以上,且荧光强度与DAN含量成正比示踪染料和分子量标准参照物二实验原理M1234PCR产物的琼脂糖凝胶电泳三实验材料、用具及试剂提取的水稻总DNA和PCR产物电泳仪,电泳槽,电子水平,移液器,枪头,三角瓶、点样板,微波炉等琼脂糖,TAE电泳缓冲液,Goodview,载样缓冲液(Loadingbuffer)四、实验步骤1制胶:100ml(0.5×TAE)+0.8g琼脂糖三角瓶(1/3)煮胶

3、溶解,冷却至60℃(不烫手),加Goodview,倒板(4-6mm),室温下充分凝固,竖直拔下梳子2点样:5μl水稻总DNA+1μ2loadingbuffer=7μlPCR产物+3μlloadingbuffer,混匀,吸取10μl10μlⅢMarkDNA(λDNA-HindⅢ)3电泳:电压3-5V/cm,约80-90V,注意电极方向4观察:紫外透射分析仪下观察,时间不要太久四、实验步骤五注意事项1倒胶时把握好胶的温度,不要高于60℃,否则温度太高会使制板变形2胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上,不要弄坏点样孔3点样时枪头下伸,点样孔

4、内不能有气泡,缓冲液不要太多4Goodview有毒,切勿用手接触,更不要污染环境,胶勿乱扔5紫外线照射不要太久六作业画出电泳图,分析观察到的结果

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