02琼脂糖凝胶电泳.ppt

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1、AgaroseGelElectrophoresis琼脂糖凝胶电泳2021/7/211Aftertheexperimentisfinished,studentsshouldknowhowtomakeanagarosegel.掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。一、实验目的(ExperimentalPurpose)2021/7/212Gelelectrophoresis2021/7/213二、实验原理(ExperimentalPrinciple)Electrophoresisisatechniqueusedtoseparateandso

2、metimespurifyproteinsandnucleicacids,whichdifferinsize,chargeorconformationfromeachother.Electrophoresishasbecomethemostwidelyusedtechniquesinbiochemistryandmolecularbiology.电泳常用于分离和纯化那些分子大小、电荷性状或分子构象有所不同的生物大分子——尤其是蛋白质和核酸。正因为如此，电泳已成为生物化学和分子生物学中应用最为广泛的技术之一。2021/7/214A

3、garoseisapolysaccharideextractedfromseaweed.Agarosegelshavealargerangeofseparation,butrelativelylowresolvingpower.Byvaryingtheconcentrationofagarose,fragmentsofDNAfromabout200to50,000bpcanbeseparatedusingstandardelectrophoretictechniques.琼脂糖是一种海藻多糖，琼脂糖胶分离范围很大，但其分辨率却相

4、对较低。通过改变琼脂糖凝胶的浓度，应用标准的电泳技术可以分离200到50,000bp大小的DNA片断。琼脂糖凝胶浓度越大，凝胶就越硬。较高浓度的琼脂糖胶有利于较小的DNA片断分离，而较低浓度的琼脂糖胶则可以分离较大的DNA片断。Thehighertheagaroseconcentration,the"stiffer"thegel.HigherconcentrationsofagarosehelpintheseparationofsmallDNAs,whilelowagaroseconcentrationsallowresolut

5、ionoflargerDNAs.2021/7/215Agaroseistypicallyusedatconcentrationsof0.5%to2%.ThedistanceDNAhasmigratedinthegelcanbejudgedbyvisuallymonitoringmigrationofthetrackingdyes.琼脂糖胶浓度一般在0.5％到2％之间。通过观察示踪染料的迁移距离可以判断DNA的迁移距离。溴酚蓝染料在琼脂糖凝胶的迁移速率最大。当迁移足够距离后，就可以通过Gelview染色来观察DNA片断。Whena

6、dequatemigrationhasoccured,DNAfragmentscanbevisualizedbystainingwithGelview.2021/7/216琼脂糖凝胶浓度0.3%0.6%0.9%1.2%1.5%2%DNA片段分离范围6-60kb1-20kb0.5-7kb0.4-6kb0.2-3kb0.1-2kb2021/7/217Gelviewisafluorescentdye.Itisoftenincorporatedintothegelsothatstainingoccursduringelectrophor

7、esis,butthegelcanalsobestainedafterelectrophoresisbysoakinginadilutesolutionofGelview.TovisualizeDNAorRNA,thegelisplacedonaultraviolettransilluminator.Gelview是一种荧光染料。它可以在做胶时混入其中在电泳时进行染色，也可以待电泳完成后将凝胶浸泡在稀释的Gelview溶液中进行染色。但必须将凝胶置于紫外透射仪中才可以对凝胶中的DNA或RNA进行观察。2021/7/218三、试剂

8、与器材（Reagentsandapparatus）1.Agarose.2.TBE[5×stocksolution(1liter):54gTrisbase,27.5gboricacid,20ml0.5MEDTA,pH8.0].3.10×loadingbuffer: