02质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分析.ppt

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1、实验二质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分析1、实验目的：学习琼脂糖凝胶电泳的原理与方法,及利用琼脂糖凝胶电泳检测纯度，浓度并分析质粒构型。2、实验原理：电泳检测技术质粒构型电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象正极负极带负电粒子带正电粒子电泳概念及种类琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳一般都采用水平式电泳槽，它具有灌胶、制板、点样等操作方便的优点；也可用于制备不同大小的凝胶；即使低浓度的琼脂糖凝胶也不易碎裂；而且器材廉价耐用。DNA的分子量DNA的构象*琼脂糖浓度*影响琼脂糖电泳迁移率的主要因素分子量MarkerDNA(EcoRIHi

2、ndIII)100bpMarker1kbMarker不同构像质粒质粒电泳图pBSKSChiA琼脂糖含（%）DNA片段的有效分离范围(kb)0.35-600.51-300.61-200.70.8-121.00.5-101.20.4-61.50.2-42.00.1-3分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度实验操作1.用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住，形成一个胶模并水平放置。2.按水平板的长×宽×0.5cm胶厚，量取1×TAE，并按1％的浓度称取琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔*（清澈透明）。3.等凝胶温度降至大约50－60℃以下时，加入1

3、mg/L溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5ug/mL；摇匀并平稳倒入水平电泳板中，除掉气泡，插入梳子*。4.凝固后，将梳子轻轻拔出。5.去掉胶带，将水平板放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中，并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。6.在parafilm膜（疏水性膜）上依次加：质粒DNA10ul上样缓冲液2ul（一小滴）分别混匀后点样，记录点样次序。7.盖好电泳槽盖子，选择适当的电泳电压（≤5V/cm）及电泳方向(DNA阴极向阳极），开始电泳。8.当溴酚兰带离开上样孔约2－3cm时，停止电泳，样品在紫外灯下观察、成像。