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《宫颈癌dkk—3基因启动子甲基化检测及其临床意义.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、宫颈癌DKK—3基因启动子甲基化检测及其临床意义［摘要］目的检测宫颈癌DKK-3基因启动子甲基化情况并研究其临床意义。方法采用甲基化特异性卩CR检测宫颈癌患者和健康女性宫颈活检组织或术后病理组织DKK-3基因启动子甲基化情况，比较其差异并分析宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化与临床病理因索的关系。结果宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率显著高于健康女性(P0.05),在HPV感染、分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和Figo分期中的差异均有统计学意义(1X0.05)。结论宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率显著高于健
2、康女性，且与病情及预后密切相关。［关键词］宫颈癌;DKK-3基因启动子；甲基化；临床意义［中图分类号］R711.74［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2013)12(b)-0087-03宫颈癌的发病机制与基因启动子甲基化等表观遗传学改变密切相关，目前发现越来越多的基因参与了宫颈癌的发病，可作为宫颈癌病情及预后评估的标志物［1-2］oDickkopf相关蛋白3(Dickkopf-relatedprotein3,DKK-3)基因具有抑制细胞增殖作用，与肿瘤的发生、发展、转移及预后紧密相关，具基因启动子甲基化在多种肿瘤中
3、可反映病情及预后，成为肿瘤基因水平的标志物［3-4］o本研究比较了宫颈癌患者和健康女性的DKK-3基因启动子甲基化状态，研究DKK-3基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料选择2009年1月〜2012年12月确诊的80例宫颈癌患者为研究对象,均经临床表现、体格检查、影像学检查、细胞学和病理组织学检查确诊，年龄31〜80岁,平均（50.9±12.7）岁；病理类型：鳞癌53例，腺癌16例，腺鳞癌11例；根据FIGO2009分期标准，I期16例，II期33例，III期21例，IV期10例。另以同期
4、参加健康体检的80例健康女性作为比较对象，年龄30-80岁，平均（51.1土14.6岁）。两组研究对象在年龄等一般资料方面比较，差异无统计学意义（卩>0.05）,具有可比性。1.2DKK-3基因启动子甲基化检测方法对所有研究对象宫颈取活检组织或术后病理标本后立即提取基因组DNA,采用甲基化特异性PCR检测DKK-3基因启动子甲基化。将提取的基因组DNA行重硫酸盐转化，转化后的样本进行PCR扩增。引物采用Methprimer设计，序列见表1,反应体系为25u1,反应条件为95°C预变性12min,95°C变性1min,64°C退火
5、45s,72°C延伸45s,共35个循环，最后一轮72°C延伸10mine扩增后的产物经琼脂糖凝胶电泳后检测。1.3统计学方法采用SPSS11・5统计学软件对相关数据进行分析，计数资料比较采用x2检验或Fisher精确概率法计算，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2・1宫颈癌患者和健康女性DKK-3基因启动子甲基化的比较宫颈癌患者中有49例宫颈活检组织检测到DKK-3基因启动子甲基化,甲基化率为61.3%；健康女性中有2例检测到DKK-3基因启动子甲基化，甲基化率为2.5%,宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率显著高于健
6、康女性（1X0.05）（图1为某宫颈癌患者及健康女性的PCR图）。2.2不同临床病理因素中DKK-3基因启动子甲基化差异的比较宫颈癌患者宫颈活检组织DKK-3基因启动子甲基化率在年龄、吸烟史、酗酒史和病理类型中差异均无统计学意义（P>0・05）,在HPV感染、分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和FIG0分期屮的差异均有统计学意义（卩〈0.05）,H卩V感染、分化程度低、肿瘤直径大、有淋巴结转移、有远处转移和FIGO分期晩期患者DKK-3基因启动子甲基化率显著高于无IIPV感染、分化程度高、肿瘤直径小、无淋巴结转移、无远处转
7、移和FIGO分期早期患者（表2）。3讨论DNA甲基化是表观遗传学最主耍的调控基因表达方式，是一种非DNA序列改变的转录前基因调控，甲基化CG位点导致DNA序列致密化，结合甲基结合蛋白后可阻遏转录因子形成转录复合物从而抑制基因表达，目前研究发现DNA甲基化调控主要集中在富含CG位点的基因启动子区域［5］。大量的体内外实验表明基因启动子甲基化导致基因处于表达抑制状态，抑癌基因的表达下降导致正常细胞失去调控而癌变，在众多肿瘤中可检测到抑癌基因启动子的甲基化状态［6-7］oDKK-3属于DKK基因家族成员之一，经典的DKK家族被认为是W
8、nt信号传导通路的调控因子，但目前对DKK-3的功能尚未完全清楚，人多数研究表明其具有促进细胞凋亡和肿瘤血管产生的作用，在多种肿瘤细胞中表现为低表达状态［8］。目前研究发现，DKK-3基因启动子在消化道肿瘤、呼吸系统肿瘤筹众多肿瘤中处于高甲基化状态，且其甲基化与
