大鼠重症急性胰腺炎模型制备方法的探讨与改进.doc

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1、人鼠重症急性胰腺炎模型制备方法的探讨与改进［摘要］目的：探讨大鼠重症急性胰腺炎模型制备方法的改进。方法：36只健康SD大鼠随机分为模型纟R（n二18）和对照纟fl（-18）。应用硬膜外导管经I-二指肠乳头逆行胰肌管穿刺注射5%牛磺胆酸钠诱导人鼠重症急性胰腺炎；使用创面封闭胶封闭穿刺孔。两组人鼠分别于术后3、6、12h检测腹水量、血清淀粉酶活性，观察胰腺大体及光镜下病理改变并评分。结果：模型组触腺呈出血坏死性改变，3、6、12h的腹水量，血清淀粉酶活性，大体及镜下评分均显著高于对照纟R（P<0.05）o结论：联合应用硬膜外导管和创面封闭胶对逆行胰肌管穿刺注射法加以

2、改进，具有创伤小，操作简单，诱导成功率高，模型稳定性好等优点，是一种较理想的制模方法。［关键词］重症急性胰腺炎；动物模型；硬膜外导管；创面封闭胶；改进［中图分类号1R576［文献标识码］A［文章编号11673-7210（2007）04（b）-022-03急性胰腺炎的发病机制尚不I-分清楚，制备动物模型来模拟人类急性胰腺炎的病变将有助于进一步研究英发病机制，并可结合实验性治疗探索临床治疗的新途径。逆行胰胆管穿刺注射牛磺胆酸钠制备的大鼠重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis,SAP）模型，在病因、发病机制及病理改变等方面与人类腹汁反流性胰腺炎

3、极为相似，是li前应用最为广泛的侵入性胰腺炎模型制备方法。我们在文献冋顾和预实验的基础上对其进行探讨并加以改进,现报道如下：1材料与方法1.1实验动物及分组健康清洁级SD大鼠36只（购自南华大学动物实验屮心），雌雄不拘，体重（280±20）g,购冋后适应性喂养1周。随机分为模型组、对照组，每纟R18只。1.2实验材料及试剂戊巴比妥钠（上海试剂采购供应试剂厂）；硬膜外导管（深圳凯思特精T駅料有限公司）:拉细至直径为0.8〜1.0mm,1:1000新洁尔灭浸泡消毒；微量泵（OLYMPUS公司）；牛磺胆.酸钠（北京丰特斯化工材料有限公司）；仓恤封闭胶（广州香雪生物医学

4、工稈有限公司）。1.3实验方法术前大鼠禁食12h,白由饮水。2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。麻醉满意后固定于手术台,术野备皮，2%络合碘消毒，铺无菌单。模型组取上腹部正中切口进腹。显嘉、提取十二指肠,辨认胰胆•管及肝门部胆•总管，顺胰胆管走行观察乳头开口，于其开口略偏下对系膜缘肠壁上选一无血管区，用5号注射器针头戳一小孔，置入拉细的硬膜外导管。导管前端贴系膜缘肠壁向乳头开口方向缓慢滑行，探入胰肌管内，顺其走行推进4-5伽后，在胰胆管下段外放置一短木棒（截取无菌棉签棒白制），用小圆针1号线将胰胆管下段及其内的导管一并缝扎，确认导管通畅后打结于木棒上，同法缝扎关闭肝门部

5、胆总管。导管末端接输液转换器，用微量泵逆行泵入5%牛磺胆酸钠（0.1ml/100g,0.2ml/min）,2-3min后即可见胰腺充血、水肿,胰胆管及主胰管扩张（图1）,维持8-10min后剪线,退出导管。按摩肠壁穿刺孔1-2min,创面封闭胶封闭穿刺孔。将肠管复位，分层关腹。对照组仅翻动I-二指肠、胰腺后关腹。大鼠术后均于大腿外侧皮下补液（生理盐水2ml/100g）,苏醒后禁食，白由饮水。1.4观察指标分别于术后3、6、12h剖腹。肉眼观察胰腺大体病理改变，并根据IIughesEl］标准评分。观察腹水颜色，收集腹水并计竜。下腔静脉采血检测血清淀粉酶活性。取胰腺

6、组织，制作石蜡标木切片观察，根据Schmidt［2］及Sporman［3］标准评分。1.5统计学处理所有数据用均数土标准差（X土s）表示，采用SPSS13.0软件进行t检验，P<0.05为有显著性差异。2结果2.1胰腺大体病理学改变及评分模型组术后3h：胰腺轮廓模糊，局部呈黏冻样出血改变（图2）；腹腔内可见屮最浅红色腹水；未见皂化斑。6h：胰腺轮廓不清，广泛出血，可见散在分布的暗红色点灶状坏死;腹腔内可见大量暗红色腹水；胰腺、胰周可见皂化斑。12h：胰腺轮廓消失，出血坏死严重,可见广泛分布的暗黑色坏死灶；腹腔内可见大量血性腹水；牍腺、胰周及肠系膜根部可见大量皂化

7、斑（图3）。对照组术后各时间点：胰腺组织颜色均匀，光泽度好，腹腔内未见明显腹水及皂化斑。各时间点大体评分，模型组显著高于对照组（P<0.05=（表1）。2.2胰腺镜下病理学改变及评分模型纟fl胰腺腺泡细胞肿胀，可见灶性坏死，腺泡细胞间有大量炎症细胞浸润；小叶排列紊乱，英间充斥人量炎性渗出；坏死区内腺泡结构消失，胞核溶解；叶间隙增宽，间质微血管破裂，大量红细胞溢出（图4）；病变严亜:程度随术后时间延长而加重。对照组除部分腺泡细胞水肿外，小叶及间质结构淸晰，间质内未见炎症细胞浸润。备时间点纽•织评分，模型组显著高于对照组（P<0.05）（表1）。2.3腹水量及血清淀

8、粉酶活性（表1）3讨论自